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载脂蛋白A-I(ApoA-I)是人体内高密度脂蛋白(HDL)的主要成份,对于高密度脂蛋白的抗动脉粥样硬化和抗血栓特性起关键性作用.载脂蛋白A-I<,米兰变体>(Apo A-I<,Milano>)是载脂蛋白A-I的分子突变体,由载脂蛋白A-I氨基酸序列中173位的精氨酸突变为半胱氨酸而成.该文主要研究建立了一套有效快速的复性纯化载脂蛋白A-I<,米兰变体>的工艺流程.重组人脂蛋白A-I<,米兰变体>(Apo A-I<,Milano>)以包涵体形式在大肠杆菌宿主系统中实现高表达.通过溶菌酶和超声波破碎法的结合,快速有效的破碎菌体收获目的蛋白包涵体.通过以Triton X-100和2 mol/L的尿素对收获的包涵体的洗涤,获得了较高纯度的目的蛋白包涵体.考察了不同溶解方法对包涵体溶解的效率,确定以4 mol/L的尿素溶解包涵体.通过对6种不同疏水分离介质复性ApoA-I<,Milano>的效果,确定以Hitrap Phenyl复性ApoA-I<,Milano>变性蛋白.优化了Hitrap Phenyl复性Apo A-I<,Milano>的层析条件,在低盐浓度条件下(0.5 mol/L(NH<,4>)<,2>SO<,4>)选择性的吸附目的蛋白去处杂蛋白.以4-0mol/L的尿素递减梯度对Apo A-I<,Milano>进行柱上原位复性.复性后的蛋白无需进行其他附加操作,直接以Hitrap DEAE阴离子交换层析对目的蛋白进行精纯.通过上述方法,目的蛋白Apo A-I<,Milano>恢复了其生物活性,蛋白纯度达到电泳纯(95％),整个工艺流程的蛋白收率达到52％.该工艺能快速有效的对目的蛋白进行复性、纯化,并且有望放大至工业生产规模.