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乙型肝炎是一种严重威胁人类健康的疾病,如不及时治疗,会导致肝硬化、肝癌等恶性疾病,甚至死亡。疫苗接种是预防乙肝的有效手段,但是对于乙肝治疗尤其是慢性乙肝的治疗却作用甚微——传统的疫苗主要诱导机体产生体液免疫反应,而产生的细胞免疫反应较弱,细胞免疫在清除机体内病毒发挥着核心作用。为此研发可引发高水平细胞免疫反应的疫苗成为疫苗研究的热点。治疗性疫苗因可诱发强烈的细胞免疫而受到研究人员的青睐,而DNA疫苗则是治疗性疫苗中颇具前景的一员。DNA疫苗虽可诱发较为理想的细胞和体液免疫反应,但仍存在一定不足,即在个体较大的动物以及人中诱发的免疫反应较弱,免疫效果不理想。为此研究人员通过不同途径寻求克服此缺点的方法。佐剂可以有效增强抗原引发的免疫反应并有效延长其发挥效用的时间,故被认为是一种增强疫苗免疫效果的理想方法。黄芪多糖(APS)是中药黄芪的主要活性成分,具有良好的免疫增强作用,可促进机体CD4+T淋巴细胞的增殖以及IL-2和IFN-γ的水平,促进脾细胞以及B淋巴细胞的增殖,同时可以促使树突细胞成熟,增强其抗原呈递能力并激活巨噬细胞。本研究选取黄芪多糖作为佐剂,与重组pcDS2质粒一同免疫小鼠,通过检测小鼠体液和细胞免疫反应水平来评价其对小鼠免疫反应的影响；并研究其对树突细胞成熟的作用,以期阐明其影响免疫反应的机理。本研究选取6-8周龄健康雌性昆明白小鼠50只,随机分为5组,每组10只。各试验组处理分别为：空白对照,仅注射质粒载体,仅注射重组的pcDS2质粒,注射pcDS2质粒和APS,仅注射APS,并依次命名为Naive组、pcDNA3组、pcDS2组、pcDS2+APS组和APS组。初次免疫时间设为0天,初免后的第14和第28天各加强免疫一次,于第35天采集血清测定抗体含量,制备脾脏细胞悬液测定T细胞增殖能力、表面分子及细胞因子的表达水平、CTL杀伤能力以及信号通路分子NF-κB和p38 MAPK表达水平。本研究取得的结果如下：Naive组、pcDNA3组和APS组抗体水平为阴性,pcDS2+APS组抗体含量(8464.8ng/ml)显著高于pcDS2组(3319.6ng/ml)。CD4+T细胞表达IL-4水平(用表达IL-4 CD4+T细胞占总CD4+T细胞的比例来表示)Naive组、pcDNA3组、pcDS2组、pcDS2+APS组、APS组分别为0.64%、0.97%、1.06%、1.42%、0.90%,其中pcDS2+APS组明显高于其它对照组,说明APS可诱导机体免疫反应向Th2型发展。上述结果表明APS作为佐剂可增强小鼠的体液免疫反应。Naive组、pcDNA3组、pcDS2组、pcDS2+APS组、APS组的T细胞增殖刺激指数分别为1.4、1.4、2.4、3.2和1.7。pcDS2+APS组显著高于其他对照组,表现出最佳的增殖能力。CD4’T细胞IL-2表达水平Naive组、pcDNA3组、pcDS2组、pcDS2+APS组以及APS组分别为0.26%、0.43%、0.58%、3.42%和0.36%。pcDS2+APS组IL-2表达水平最高,显著高于其他组,说明APS具有良好的促T细胞增殖能力。CD4’T细胞和CD8’T细胞IFN-y的表达水平各组(顺序同前)分别为0.10%和0.21%、O.10%和0.27%、0.11%和0.30%、0.23%和0.43%以及O.14%和0.27%。pcDS2+APS组表达水平与其它各组相比差异显著,说明APS具备诱导机体Thl型免疫反应的能力。体内CTL杀伤实验pcDS2+APS组杀伤靶细胞的水平最高(56.5%),亦显著高于其它对照组(Naive组2%,pcDNA3组5.9%,pcDS2组27.6%,APS组3.9%)以上结果表明APS作为佐剂可增强小鼠的细胞免疫反应。共刺激信号分子CD40、CD80、CD86的表达水平分别为Naive组0.69%、0.57%、0.49%,pcDNA3组0.66%、0.51%、0.55%,pcDS2组0.92%、0.77%、0.88%,pcDS2+APS组1.15%、1.10%、1.23%,APS0.78%、0.64%、0.78%,其中pcDS2+APS组三种分子的表达均高于其它对照组,显示出最强的为T细胞激活提供第二信号的能力；DCMHCI类和II类分子以及趋化因子受体CCR7的表达亦为pcDS2+APS组表达水平最高。此外,pcDS2+APS组中参与DC成熟信号通路的分子NF-κB和p38 MAPK表达水平也高于其他试验组。以上结果表明APS促进了免疫小鼠树突细胞的成熟。综上所述,APS作为HBV DNA疫苗佐剂可促进免疫小鼠DC成熟,提高Th活性,增强细胞和体液免疫反应。本研究为增强HBV DNA疫苗的免疫效果提供新的途径,同时表明APS具备良好的佐剂潜力,展示出良好的应用前景。