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目的:探讨microRNA-34a(miR-34a)在褐藻胶寡糖(AOS)延缓D-半乳糖(D-gal)诱导的心肌细胞衰老中的作用及其可能的分子机制。方法:实验分六组:对照(Control)组、模型(D-gal)组、D-半乳糖+褐藻胶寡糖(D-gal+AOS)组、褐藻胶寡糖(AOS)组、D-半乳糖+褐藻胶寡糖+microRNA-34a mimic(D-gal+AOS+mi R-34a mimic)组、D-半乳糖+褐藻胶寡糖+microRNA-Negative Control(D-gal+AOS+miR-NC)组。D-gal+AOS+miR-34a mimic和D-gal+AOS+miR-NC组分别用Lipofectamine~TMM 3000转染mi R-34a mimic(50nM)和miR-NC(50nM),4-6h后换液。D-gal、D-gal+AOS、D-gal+AOS+miR-34a mimic和D-gal+AOS+miR-NC组细胞用D-gal(200m M)干预48h诱导心肌细胞衰老模型。48h后D-gal+AOS、AOS、D-gal+AOS+miR-34a mimic和D-gal+AOS+miR-NC组用AOS(100μg/mL)干预细胞48h,Control组给予同步换液处理。待细胞干预结束后,用β-半乳糖苷酶染色法检测衰老心肌细胞数目;RT-PCR检测miR-34a的表达;线粒体膜电位检测法检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测衰老相关蛋白p16、p21和p53的表达,SIRT1和PGC1α蛋白的表达,氧化应激相关蛋白p47 phox和gp91 phox的表达;免疫共沉淀法检测SIRT1与PGC1α之间的相互作用;RT-PCR检测SIRT1和PGC1αmRNA的表达。结果:1.β-半乳糖苷酶染色结果显示:与Control组相比,D-gal组β-半乳糖苷酶染色阳性率明显增加,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal组相比,AOS干预后β-半乳糖苷酶染色阳性率明显降低,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+mi R-34a mimic组β-半乳糖苷酶染色阳性率明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。2.miR-34a的表达结果显示:与Control组相比,D-gal组miR-34a的表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal组相比,AOS干预后miR-34a的表达明显减少,差异有统计学意义(p<0.01)。与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+miR-34a mimic组mi R-34a的表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。3.线粒体膜电位检测结果显示:与Control组相比,D-gal组线粒体膜电位下降,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal组相比,AOS干预后可使线粒体膜电位升高,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal+AOS+mi R-NC组相比,D-gal+AOS+miR-34a mimic组线粒体膜电位明显下降,差异有统计学意义(p<0.01)。4.Western blot结果显示:与Control组相比,D-gal组心肌细胞衰老相关蛋白p16、p21、p53表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal组相比,AOS干预后使衰老相关蛋白p16、p21、p53表达明显降低,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal+AOS+mi R-NC组相比,D-gal+AOS+miR-34a mimic组心肌细胞衰老相关蛋白p16、p21、p53表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01)。5.Western blot结果显示:与Control组相比,D-gal组SIRT1和PGC1α蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal组相比,AOS干预后SIRT1和PGC1α蛋白表达明显上调,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+miR-34a mimic组SIRT1和PGC1α蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(p<0.05)。6.免疫共沉淀结果显示:与Control组相比,D-gal组SIRT1和PGC1α结合减少,降低了线粒体生物合成功能;与D-gal组相比,AOS干预后SIRT1和PGC1α结合增加,改善了线粒体生物合成功能;与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+miR-34a mimic组SIRT1和PGC1α结合减少。7.Western blot结果显示:与Control组相比,D-gal组氧化应激相关蛋白p47 phox和gp91 phox表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.05);与D-gal组相比,AOS干预后可降低氧化应激相关蛋白p47 phox和gp91 phox的表达,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+miR-34a mimic组氧化应激相关蛋白p47 phox和gp91 phox的表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.05)。8.SIRT1和PGC1αmRNA的表达结果显示:与Control组相比,D-gal组SIRT1和PGC1αmRNA的表达明显降低,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal组相比,AOS干预后SIRT1和PGC1αmRNA的表达明显增加,差异有统计学意义(p<0.01);与D-gal+AOS+miR-NC组相比,D-gal+AOS+mi R-34a mimic组SIRT1和PGC1αmRNA的表达明显降低,差异有统计学意义(p<0.01)。结论:AOS通过调控miR-34a改善线粒体功能和氧化应激的作用延缓D-gal诱导的心肌细胞衰老。