重组人β防御素-2抗胃癌BGC823活性研究

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人p防御素-2(hBD2),是一种普遍表达在人体上皮组织的内源性抗微生物肽。有着广谱高效的抗微生物作用,具有机体免疫应答、化学趋化及其他蛋白酶的协同作用,但关于人β防御素与肿瘤之间的确切关系仍未见到研究文献报道。胃癌已成为当前威胁人类健康的第二大恶性肿瘤,传统的治疗手段不能很好的解决胃癌转移和复发的问题,寻找安全高效的治疗手段已经成为目前急需要处理的问题。目的:重组真核表达质粒pCMV-hBD2,并瞬时转染于胃癌细胞株(BGC823)与正常人胃粘膜细胞(GES-1)中。检测相对高表达hBD2对胃癌细胞株BGC823的活性影响,并初步探讨其机理。方法:利用分子生物学方法重组pCMV-hBD2真核表达质粒,通过非脂质体转染试剂转染于胃癌细胞株(BGC823)与正常人胃粘膜细胞(GES-1)内。在瞬时表达期间,用荧光实时定量PCR和Western blotting检验hBD2在mRNA和蛋白水平的表达情况。并运用MTS法、克隆存活实验、Transwell迁移和侵袭小室实验,检测其对BGC823细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭功能的影响。同时通过荧光定量PCR和Western blotting检验MMP2在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果:重组载体经核酸序列测序后,证实接入目的基因hBD2片段方向正确,基因序列与基因库所报道核苷酸序列相符。检测到转染hBD2细胞组,其hBD2相对表达量显著高于其余组。BGC823细胞转染hBD2组较于其他组,增殖和克隆形成显著性降低,但正常胃粘膜细胞GES-1增殖未受影响。观察到转染hBD2的BGC823细胞组较于其他组,迁移和侵袭的活性被明显抑制。并且发现转染hBD2的BGC823细胞MMP2相对表达量显著下降。结论:成功构建hBD2的真核表达质粒pCMV-hBD2; hBD2显著抑制胃癌BGC823细胞增殖、克隆过程,但不影响正常细胞GES-1增殖;hBD2还有效降低BGC823细胞的迁移和侵袭功能;hBD2的抑制BGC823的这种作用可能是通过抑制MMP2的表达实现的。
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