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本论文通过从全国各地进行广泛采样,分离和筛选出磷脂酶C(phospholipaseC,简称PLC)产量高、抗血小板功能强的微生物菌种,在此基础上对其进行种类鉴定,同时,还对产酶条件以及所产磷脂酶C的理化特性进行了研究,从而为今后将磷脂酶C研制开发成抗血小板聚集一类新药打下坚实的实验基础。一、本研究采用的主要方法如下:1.菌种分离采用卵黄琼脂LB平板分离法:2.菌种筛选采用卵黄硼砂平板酶活定性检测、菌体生物量和用对硝基磷酸胆碱(p-nitrophehylphosphoryl-choline,简称NPPC)作为磷脂酶C的作用底物进行酶活定量检测以及抗血小板聚集率等多指标多轮次筛选。3.菌种的分类鉴定采用菌株的个体形态学特征和群体形态学特征、生理生化特性及16S rRNA序列等依据进行。4.培养条件的优化实验采用正交实验方法。主要考虑培养基、接种量、培养温度、培养时间及摇床转速等对磷脂酶C产酶活水平的影响。5.磷脂酶C分子量测定采用不连续SDS-PAGE法。6.磷脂酶C酶活力测定采用卵黄硼砂平板法和NPPC法。7.磷脂酶C溶血活性测定采用血平板法。二、主要实验结果如下:1.从1268份土样中筛选获得了4株新的高产磷脂酶C优良菌株,分别将其分类鉴定为:Bacillus cereus Shenzhen 754-1、B.mycoides Shenzhen 779、B.mycoidesShenzhen 970和B.mycoides Shenzhen 1107。2.B.cereus Shenzhen 754-1摇瓶培养产磷脂酶C的最佳产酶条件为:培养基(1%蛋白胨,0.3%牛肉膏),培养温度28℃,培养时间12h,接种量0.5%,转速200r/min。在此培养条件下,B.cereus Shenzhen 754-1磷脂酶C的产酶水平达到26U/ml。3.纯化的磷脂酶C样品分子量为75100 Da,对热较敏感,70℃水浴处理5min即可使酶全部失活。4.该纯化的磷脂酶C样品在血平板上不表现任何的溶血活性。在NPPC反应系统中表现出的酶反应最适温度为60℃,最适pH值在pH7.0-7.2左右。5.通过本课题的研究,获得了4株新的高产磷脂酶C菌株,其中的B.cereusShenzhen 754-1产磷脂酶C水平超过了国内外文献报道的最高产酶水平。其所产磷脂酶C的特性与其它微生物磷脂酶C的特性不同。