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目的 本课题通过筛选出低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)高表达的消化道肿瘤细胞株并敲降LRP1,探讨LRP1对消化道肿瘤细胞生长的影响,进一步探究LRP1对肿瘤细胞相关信号通路蛋白的影响。通过一系列相关机制的研究,进而为临床应用建立理论基础,为今后治疗消化道肿瘤提供新的方案。方法 1.Western blot实验和Q-PCR实验筛选出LRP1高表达的消化道肿瘤细胞株。2.LV-LRP1-RNAi慢病毒和阴性对照病毒(NC)转染消化道肿瘤细胞,并构建稳定敲降LRP1的细胞株。3.Western blot实验检测LRP1敲降情况及其相关信号通路的影响。4.CCK-8法检测LRP1敲降前后消化道肿瘤细胞生长变化;EdU-594细胞增殖检测试剂盒检测细胞增殖情况;细胞克隆形成实验检测LRP1敲降前后消化道肿瘤细胞的群体依赖性和增殖能力的改变。5.Transwell实验和划痕实验分别检测细胞纵向和横向侵袭转移能力;Western blot实验检测侵袭转移相关蛋白表达的变化。6.HE染色法比较人消化道肿瘤组织与正常组织的差异。7.免疫组化比较人消化道肿瘤组织与正常组织中LRP1表达的差异。8.Q-PCR法检测LRP1敲降前后脂质代谢相关基因表达的变化。9.油红O染色比较胰腺癌BxPC-3细胞LRP1敲降前后脂质含量多少。结果 1.Western blot实验和Q-PCR实验结果显示,与对照组人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞相比,胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞LRP1表达显著上升。2.LV-LRP1-RNAi慢病毒转染后,Western blot实验结果显示,与shNC相比,胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞中LRP1蛋白表达明显下降。3.EdU-594细胞增殖实验和CCK-8实验结果显示,与shNC相比,LRP1敲降后,胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞增殖能力减弱。Western blot实验结果显示,LRP1敲降后,胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞中p-AKT、EGFR蛋白表达下调。4.细胞克隆形成实验结果显示,与shNC相比,LRP1敲降后胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞克隆形成能力下降。5.Transwell实验和划痕实验结果显示,与shNC相比,LRP1敲降后胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞侵袭转移能力减弱。Western blot实验结果显示,LRP1敲降后,胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞p-ERK、MMP-9蛋白表达下降。6.免疫组化实验结果显示,与正常消化道组织相比,肿瘤组织中LRP1表达明显上调。7.Q-PCR实验结果显示,敲降LRP1后,肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞中与脂质吸收相关基因CD36表达明显下降。8.油红O染色实验结果显示,胰腺癌BxPC-3细胞LRP1敲降后,脂质含量增加,脂质堆积。结论 1.LRP1在胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞中高表达2.敲降胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞的LRP1蛋白能抑制肿瘤细胞增殖及抑制相关蛋白表达。3.敲降胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞的LRP1蛋白抑制肿瘤细胞克隆形成能力。4.敲降胃癌SGC-7901细胞、肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞的LRP1蛋白抑制肿瘤细胞侵袭转移能力及抑制侵袭相关蛋白表达。5.与人消化道正常组织相比,肿瘤组织LRP1蛋白表达上升。6.LRP1敲降后,肝癌SMML-7721细胞和胰腺癌BxPC-3细胞中与脂质吸收相关的CD36基因表达下降,脂质吸收障碍,导致脂质堆积。