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漆酶是一种酚氧化酶，属于多铜氧化酶家族，4个Cu2+作为辅因子与酶的催化活性中心结合。漆酶的底物包括多种酚类和非酚类物质，且催化氧化的过程中所需能量少，不额外产生有害的副产物，故漆酶作为一种经济环保的绿色催化剂，广泛应用于环境保护、织物印染、纸浆漂白、生物能源、食品制造、生物传感器、化学合成等诸多领域。本实验研究了Kurthia huakuii漆酶在毕赤酵母中的高效表达及其基本酶学性质，并验证了其在染料脱色应用中的可行性。 1.将来源于Kurthia huakuii LAM0618的漆酶基因通过密码子、GC含量及mRNA二级结构优化后，克隆到基于pPIC9K改造的载体pPIC9K-NTS上。重组载体经过单酶切线性化后电转入Pichia pastoris GS115中，通过浓度梯度的遗传霉素(G418)筛选获得外源基因高拷贝整合的转化子。然后通过诱导蛋白表达并检测酶活进一步筛选得到一株高表达菌株。 2.在摇瓶水平优化重组毕赤酵母的诱导条件，得出的结论为:该重组菌在28℃下诱导时，诱导培养基中添加1.0％的Tween80，每12h添加诱导剂甲醇的量为发酵液体积的1.0％，表达产物的酶活性最高，72h酶活可达6877.24U/mL，远高于目前文献所提到的最高水平; 3.酶学性质实验表明，以10mmol/L2，6-DMP（2，6-二甲氧基苯酚）作为底物时最适反应温度65℃;酶的热稳定性较好，在90℃下保温6h仍有70％以上的酶活;最适反应pH=7.0，但pH适应范围较窄，pH＜7.0或者pH＞8.0时酶活力迅速丧失;酶反应最适Cu2+浓度0.04mmol/L;1 mmol/L EDTA就能完全抑制酶活力，3mmol/L PMSF使相对酶活降低到60％;1mmol/L Mn2+能促进酶活。除此之外常见的金属离子无论浓度高低，绝大多数都会抑制酶活力。 4.将诱导表达所得的粗酶液进行染料脱色实验，结果表明在65℃下静置反应6h，该漆酶对的孔雀绿(10mg/L)和灿烂绿(10mg/L)效果较好，降解率分别可达到86.50％和70.82％;对刚果红(500mg/mL)、碱性品红（50mg/mL）和亚甲基蓝（10mg/mL）有脱色作用但不甚明显，脱色率分别为13.95％、23.03％和6.95％;对结晶紫(10mg/mL)和碱性藏红T（200mg/mL）则几乎无脱色作用。 上述研究表明Kurthia huakuii LAM0618的漆酶在毕赤酵母中能得以高效表达，且未经纯化的粗酶液的酶活力可达到6877.24U/mL(65℃，pH=7.0)，Cu2+是其必需的辅因子，在孔雀绿和灿烂绿等染料废水中脱色效果较好。