nm23-H1基因转染人膀胱癌T-24细胞株的实验研究

来源 :四川大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lm20090910
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目的:探讨电穿孔基因技术将肿瘤转移抑制基因nm23-H1导入人膀胱癌T-24细胞株的方法和合适条件,建立稳定、高效的基因转移方法。研究nm23-H1对膀胱癌T-24细胞株侵袭能力、粘附能力和趋化运动能力等肿瘤侵袭转移特性的影响。探讨nm23-H1转染对膀胱癌T-24细胞株化疗敏感性的影响。 方法:利用电穿孔介导的基因转移技术,完成转染方法的建立。利用免疫组化技术和流式细胞术,检测转染前后细胞中nm23-H1的蛋白产物核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的表达。利用Transwell小室和冲刷实验,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。采用MTT法观察nm23-H1转染对膀胱癌T-24细胞化疗敏感性的影响。 结果:使用重组的pCMV-Neo-Bam真核表达载体,将nm23-H1转染膀胱癌细胞,G418筛选并获得稳定表达。膀胱癌T-24细胞株转染nm23-H1基因前后蛋白表达水平有明显差异,转染后T-24细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低(P<0.05),转染前后侵袭细胞相对数目分别为65.60%±3.16%和33.93%±2.61%(P<0.05);转染前后趋化运动细胞相对数目分别为70.66%±3.81%和47.95%±3.51%(P<0.05)。转染前
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