论文部分内容阅读
目的:1.构建及验证模拟人类常见饮酒模式的新型酒精性肾损伤小鼠模型。2.观察sirtuin蛋白家族在酒精性肾损伤模型中的表达,重点探讨SIRT6的表达及SIRT6-p53轴参与酒精性肾损伤的可能性。方法:1.构建及验证新型酒精性肾损伤模型:选取健康雄性、57BL/6小鼠20只,适应性喂养5天后,随机分为对照组和酒精组。对照组采用对照液体饲料喂养10天加单次45%糊精灌胃,酒精组采用等热量的4.2%乙醇饲料喂养10天加单次31.5%酒精灌胃;观察两组肾脏大体结构、比较肾脏指数;H&E染色和PAS染色观察肾组织病理学改变;Real Time PCR检测肾组织纤维化及炎症细胞因子的表达;以此确定新型酒精性肾损伤模型是否构建成功。2.探究定位于细胞核和线粒体中的sirtuin家族,特别是SIRT6在酒精性肾损伤中的表达及作用:Real Time PCR检测sirtuin家族和p53的mRNA表达利用免疫荧光染色和Western Bolt检测SIRT6在肾组织中表达部位及酒精性肾损伤后SIRT6蛋白表达水平的变化。Western Bolt检测SIRT6的底物p53的蛋白表达,明确SIRT6-p53轴在酒精性肾损伤中意义。结果:1.新型酒精性肾损伤模型构建的相关结果:1)两组小鼠的状态都较好,但酒精组的肾重和肾脏指数均高于对照组(P<0.01)。2)对照组肾脏组织结构正常。H&E染色显示:相比于对照组,酒精组小鼠肾小球体积增大,肾小球系膜细胞增生,肾小管上皮细胞肿胀、间距增宽,间质内小血管表现为增生、扩张和水肿,周围有炎性细胞浸润;PAS染色显示酒精组肾小球系膜细胞和系膜基质增生。3)与对照组相比,酒精组肾脏纤维化指标TGF-β1及炎症细胞因子的mRNA表达均上调(P<0.05)。2.酒精对肾脏sirtuin家族和p53的影响:1)与对照组相比,酒精组肾脏SIRT1、SIRT6和p53的mRNA表达均上调(P<0.05),SIRT3和SIRT5的mRNA表达下调(P<0.05)。2)与对照组相比,酒精组肾脏SIRT6蛋白表达升高(P<0.001),p53蛋白表达下调(P<0.01)。3)免疫荧光染色显示,相比于对照组,酒精组小鼠肾脏SIRT6表达明显增加,而且SIRT6主要在肾小管表达。结论:1.采用慢性酒精喂养加单次急性酒精灌胃的方式成功建立了新型酒精性肾损伤小鼠模型。与以往模型相比,该模型的优势是模拟了人类常见的饮酒模式,建模时间短、可重复性高,小鼠对乙醇饲料的接受程度高,小鼠状态好。2.SIRT6在酒精性肾损伤中表达上调,可能以SIRT6-p53轴参与酒精性肾损伤的炎症及纤维化反应。