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目的:探索人肺动脉平滑肌细胞中是否存在NAADP通过激活TPC1和TPC2诱导钙释放这一信号通路,并研究其诱导钙释放的基本机制。方法:RT-PCR及蛋白印记测定人肺动脉平滑肌细胞中TPC1及TPC2的表达;使用能透膜的NAADP-AM研究人肺动脉平滑肌细胞上不同浓度NAADP对钙释放的影响;Ned-19抑制NAADP对钙释放的影响;当细胞外为零钙时研究NAADP对钙释放的影响;研究Bafilomycin A1抑制空泡H-ATP酶以阻断溶酶体上Ca/H交换来耗竭酸性钙储存后NAADP对钙释放的影响;Xestospongin C和Ryanodine分别阻断Ins P3受体和Ry R受体后NAADP对钙释放的影响。结果:1.使用实时定量RT-PCR测定TPC1和TPC2 m RNA,证实人肺动脉平滑肌细胞观察到TPC1和TPC2 m RNA表达。2.NAADP-AM以浓度依赖性调节胞浆Ca2+浓度。当NAADP-AM的浓度分别为0.25μM和0.5μM时胞浆钙浓度持续增加,当为1μM时,引起一个双相性反应,表现为在一个初始相增高峰后接着出现一段平台期。1μM NAADP-AM引起钙释放反应不受零钙溶液的影响。3.Ned-19(100μM)预处理人肺动脉平滑肌细胞20分钟阻断了NAADP-AM诱导钙反应的初始峰值并且显著降低持续相钙浓度(对照组,285.1±25.2 n M(n=6),Ned-19组,134.9±11.2 n M(n=6),p<0.01)。4.人肺动脉平滑肌细胞外生理浓度钙时为228.9±19.7(n=5),零钙时为222.1±18.4 nm(n=5),。5.用Bafilomycin A1预处理人肺动脉平滑肌细胞1小时,几乎完全阻断NAADP-AM(1μM)调控Ca2+在平均锋期和平台期的释放,对照组的平均峰值为186.4±16.9 n M(n=5),Bafilomycin A1预处理human PASMCs组平均峰值为81.4±8.8n M(n=5;p<0.05)。6.用Xestospongin C预处理细胞后钙释放峰值无变化。7.Ryanodine预处理细胞后钙释放的平均峰值部分减少,而持续相无变化。结论:1.人肺动脉平滑肌细胞上存在TPC1和TPC2,并且以TPC1的表达为主。2.NAADP呈浓度依赖性诱导钙释放。3.NAADP诱导钙释放主要来自于胞内钙储存,且很大可能性这个钙释放来自于内溶酶体系统。4.NAADP诱导的钙释放可进一步引起内质网上的钙释放