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目的:本研究旨在通过分析转染HGF的hUCMSCs对大鼠肝星状细胞系(HSCs-T6)的影响,探究转染HGF的hUCMSCs通过抑制TGF-β1/Smads信号通路的激活抑制HSCs-T6增殖,促进其凋亡,抑制其活化并减少CollagenⅠ和CollagenⅢ表达的可能作用机制,为抗肝纤维化的治疗提供研究基础。方法:采用Transwell间接共培养体系,将本研究室保存的转染HGF的hUCMSCs与HSCs-T6共培养,上层接种hUCMSCs,下层接种HSCs-T6;实验分为四组:对照组(HSCs-T6+完全培养基)、HGF组(HSCs-T6+HGF-hUCMSCs)、LV5-NC组(HSCs-T6+LV5-NC-hUCMSCs)和hUCMSC组(HSCs-T6+hUCMSCs)。共培养1,2,3d后,显微镜观察各组HSCs-T6的生长状态;MTT法检测各组HSCs-T6的细胞活力;Hoechst33342染色和流式分析法检测各组HSCs-T6的凋亡;免疫细胞化学,Western blotting及RT-PCR法检测各组HSCs-T6α-SMA,CollagenⅠ和CollagenⅢ和以及TGF-β1,Smad2和Smad3 m RNA和蛋白水平的表达。结果:1.显微镜观察结果表明,HGF组、LV5-NC组和hUCMSC组与对照组相比,HSCs-T6均皱缩变小,排列稀疏;且HGF组变化最明显;而LV5-NC组与hUCMSC组相比,HSCs-T6的生长状态无明显差异。2.MTT检测结果显示,共培养1d时,HGF组与对照组相比,OD值降低(P<0.05)。共培养2d时,HGF组、LV5-NC组和hUCMSC组与对照组相比,OD值均显著降低(P<0.01)。共培养3d时,HGF组、LV5-NC组和hUCMSC组与对照组相比,OD值的降低更为显著(P<0.001);HGF组与LV5-NC组和hUCMSC组相比,OD值均显著降低(P<0.01);LV5-NC组与hUCMSC组相比,无明显差异(P>0.05)。3.Hoechst33342染色结果显示,HGF组、LV5-NC组和hUCMSC组与对照组相比,HSCs-T6凋亡小体数目增多;且HGF组增多最明显;而LV5-NC组与hUCMSC组相比,无明显差异。流式分析结果表明,共培养1,2,3d时,HGF组、LV5-NC组和hUCMSC组与对照组相比,HSCs-T6凋亡比例均增加(P<0.05);且HGF组与LV5-NC组和hUCMSC组相比,细胞凋亡比例均增加(P<0.05);而LV5-NC组与hUCMSC组相比,无明显差异(P>0.05)。4.免疫细胞化学结果显示,共培养1d时,HGF组、hUCMSC组和LV5-NC组与对照组相比,α-SMA,CollagenⅠ和CollagenⅢ以及TGF-β1,Smad2和Smad3的表达均无明显差异(P>0.05);共培养2d和3d时,上述指标的表达均下降(P<0.05);且HGF组与hUCMSC组和LV5-NC组相比,上述指标表达均降低(P<0.05);而LV5-NC组与hUCMSC组相比,无明显差异(P>0.05)。5.RT-PCR和Western blotting结果显示,共培养2d和3d时,HGF组、hUCMSC组和LV5-NC组与对照组相比,无论是m RNA水平还是蛋白水平,α-SMA,CollagenⅠ和CollagenⅢ以及TGF-β1,Smad2和Smad3的表达均下降(P<0.05);且HGF组与hUCMSC组和LV5-NC组相比,上述指标表达均降低(P<0.05);而LV5-NC组与hUCMSC组相比,无明显差异(P>0.05)。结论:转染HGF的hUCMSCs能够降低HSCs-T6的细胞活力,促进其凋亡,使其生长受到抑制;抑制其活化,减少CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达,发挥抗肝纤维化的作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smads信号通路的激活有关。