【摘 要】
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S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methioninc,SAM)是生物体内重要的代谢中间体,已被用于多种临床症状的治疗。在利用重组毕赤酵母合成SAM时,为了得到较高的SAM合成酶(S-adenosyl-L-
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S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methioninc,SAM)是生物体内重要的代谢中间体,已被用于多种临床症状的治疗。在利用重组毕赤酵母合成SAM时,为了得到较高的SAM合成酶(S-adenosyl-L-methionine synthetase,SAMS)表达和胞内ATP供应,我们尝试了同时利用强甲醇诱导型启动子AOX1和组成型启动子GAP调控SAM合成酶在重组细胞内的表达。
为此,本文构建了诱导型和组成型表达酿酒酵母SAM合成酶基因(SAM2)的表达载体pPIC3.5K-SAM2和pGAP-SAM2,以及诱导型和组成型启动子串联型表达载体pPIC3.5KC-SAM2-GAP-SAM2。经转化宿主细胞得到了四种表达SAM合成酶的重组毕赤酵母菌株:利用AOX1启动子表达SAMS的菌株Ga,利用GAP启动子表达SAMS的菌株xg、利用双启动子表达SAMS的菌株Gde以及利用AOX1和GAP双表达单元表达SAMS的菌株Gd。
通过考察这四株重组菌的生长和SAM合成,发现含AOX1和GAP双表达单元的重组菌Gd既能受甲醇调控表达SAMS,又能以甘油为碳源表达SAMS,其SAMS表达和SAM合成水平均高于双启动子串联表达重组菌Gde。进入SAM合成期后,Gd可采取甲醇和甘油两阶段补料,该重组菌的SAMS比产率高于组成型重组菌xg,Gd进入甘油补料期后虽然SAMS比产率略低于诱导型重组菌Ga,但胞内ATP含量高于Ga。这种SAM合成酶高表达和ATP供应的提高使双表达单元菌株Gd的SAM产量比诱导型重组菌株Ga提高了76.3%,比组成型重组菌株xg提高了60.2%,达到1.41g/L。
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