内蒙古白绒山羊角蛋白14(K14)基因启动子多态性及其与绒毛性状关联性

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:zhangxu0202
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角蛋白14(Keratin14,KRT14,K14)作为哺乳类动物绒毛结构蛋白,与角蛋白5成对表达于表皮基底层细胞、绒毛及毛囊外根鞘细胞内,是覆层鳞状上皮的生物标记物。因此我们对内蒙古白绒山羊角蛋白14启动子进行了相关研究。试验一:内蒙古白绒山羊角蛋白14启动子的克隆和分析。本试验以内蒙古白绒山羊DNA为模板,参照牛的角蛋白14序列设计和合成引物,通过PCR扩增获得长度为2834bp(登录号为JQ063036),包括启动子区2631bp和结构基因第一外显子区203bp的内蒙古白绒山羊角蛋白14基因片段,对角蛋白14基因启动子结构进行了生物信息学分析,并与人和牛角蛋白14启动子序列做了比对。结果:山羊角蛋白14启动子结构与人角蛋白14启动子只含有Sox-5, GATA-1, GATA-1/2结合位点等3个共同的转录因子结合位点;但与牛的有较高的相似性,含有Sox-5, SRY, Cdx A, Myo D, MZF1, GATA-1/3, Nkx-2结合位点等7个共同的转录因子结合位点。试验二:内蒙古白绒山羊角蛋白14基因单核苷酸多态性分析。①在对内蒙古白绒山羊角蛋白14启动子序列克隆的基础上,首先以20只山羊混合DNA为模板通过克隆测序寻找多态位点,结果发现引物D2和D4扩增片段-421和-1838处出现套峰。②在-421和-1838处分别设计引物S1和S2,以150头内蒙古白绒山羊为研究对象,应用PCR-SSCP技术和DNA测序技术检测内蒙古白绒山羊角蛋白14启动子的分子变异。结果:引物S1扩增产物有AA、AG、GG3种基因型;引物S2扩增产物有CC、CT、TT3种基因型;克隆测序分析,发现-421和-1838位点分别发生了A→G和C→T的碱基突变。③群体遗传学表明:经x2检验。-421(A→G)和-1838(C→T)位点上的SNP均处于Hardy-Weinberg(P>0.05)平衡状态,且均属中度多态。-421(A→G)位点AA型个体的绒厚显著低于GG型和AG型个体,GG型个体的绒长显著高于AA型个体;-1838(C→T)位点TT型个体的毛长和毛细度均显著高于CT型个体和CC型个体,其中TT型个体的毛长相对与CT对CC型个体更显著,毛细相对于CC对CT型个体更显著。
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