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第一部分Wnt5a在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义目的:本研究检测了Wnt5a在甲状腺乳头状癌组织中的表达情况,并分析其与临床病理参数之间的关系,探讨Wnt5a信号通路在甲状腺乳头状癌进展过程中的作用。方法:1.应用免疫组织化学法检测甲状腺乳头状癌组织及对应癌旁无瘤甲状腺组织中Wnt5a的表达,同时分析Wnt5a的表达水平与甲状腺乳头状癌患者临床病理参数的相关性。2.应用Western blot检测甲状腺乳头状癌组织及对应癌旁无瘤甲状腺组织中Wnt5a蛋白的表达。3.应用实时荧光定量PCR法检测甲状腺乳头状癌组织及对应癌旁无瘤甲状腺组织中Wnt5a mRNA的表达。结果:1.免疫组化显示,67.2%(39/58)的甲状腺乳头状癌组织中Wnt5a蛋白表达阳性,31.0%(18/58)癌旁无瘤甲状腺组织中的表达为阳性,两者之间有显著性统计差异(P<0.05)。2.Wnt5a蛋白的表达水平与患者肿瘤的临床分期及淋巴转移相关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、性别及多灶性无关。3.Western blot检测显示,在甲状腺乳头状癌组织中,Wnt5a蛋白(0.98±0.11)的表达明显高于癌旁无瘤组织(0.42±0.09)(P<0.05)。4.实时定量PCR显示,Wnt5a mRNA在甲状腺乳头状癌组织中的相对表达量为(2.46±0.21)明显高于癌旁无瘤甲状腺组织(1.00±0.12)(P<0.05)。第二部分Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞增殖及侵袭能力的影响目的:探讨Wnt5a表达变化对甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的影响,并分析其在甲状腺乳头状癌发生、发展中的作用。方法:1.应用MTT方法检测敲低或过表达Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞增殖活性的影响。2.应用克隆形成实验检测敲低或过表达Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞单个细胞克隆形成能力的影响。3.应用Transwell实验检测敲低或过表达Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞侵袭能力的影响。结果:1.MTT法实验结果显示过表达Wnt5a后甲状腺乳头状癌细胞株K1及BCPAP增殖速度明显增加;敲低Wnt5a后,细胞生长受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。2.平板克隆形成实验显示过表达Wnt5a后甲状腺乳头状癌细胞株K1及BCPAP体外单细胞克隆形成能力明显增强;敲低Wnt5a后,细胞单克隆形成能力受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。3.Transwell实验结果显示过表达Wnt5a后能够提高甲状腺乳头状癌细胞株在体外的侵袭能力;而敲低Wnt5a后,能够抑制甲状腺乳头状癌细胞株在体外的侵袭能力,差异有统计学意义(P<0.05)。第三部分ROR2在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与Wnt5a的关系目的:为探讨Wnt5a信号通路在甲状腺乳头状癌中的作用,本实验检测了Wnt5a信号通路中ROR2蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达情况,并分析二者与临床病理参数之间的关系,进一步研究Wnt5a信号通路在甲状腺乳头状癌中的作用。方法:1.通过免疫组织化学与Western blot实验检测甲状腺乳头状癌组织及对应癌旁无瘤甲状腺组织中ROR2蛋白的表达,并分析Wnt5a与ROR2之间表达的相关性。同时分析ROR2的表达水平与甲状腺乳头状癌患者临床病理参数的相关性。2.应用实时荧光定量PCR法检测甲状腺乳头状癌组织及对应癌旁无瘤甲状腺组织中ROR2mRNA的表达。结果:1.免疫组化显示,甲状腺乳头状癌组织中ROR2的阳性率为62.1%(36/58),而癌旁无瘤甲状腺组织中的阳性率为39.7%(23/58),两者之间有显著性统计学差异(P<0.05)。甲状腺乳头状癌组织中ROR2蛋白表达水平与患者肿瘤的临床分期及淋巴转移相关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、性别及多灶性无关。2.Western blot检测显示,ROR2蛋白在甲状腺乳头状癌组织(0.91±0.11)中的表达明显高于癌旁无瘤甲状腺组织(0.33±0.06)(P<0.05)。3.实时定量PCR显示,ROR2 mRNA在甲状腺乳头状癌组织中的相对表达量为(2.47±0.25),明显高于癌旁无瘤甲状腺组织(1.00±0.14)(P<0.05)。4.甲状腺乳头状癌组织中Wnt5a蛋白的表达水平与ROR2蛋白表达水平呈正相关(r=0.552,P=0.001)。第四部分Wnt5a可通过ROR2调控甲状腺乳头状癌细胞的增殖及侵袭目的:检测敲低ROR2同时过表达Wnt5a对人甲状腺乳头状癌细胞株K1及BCPAP生物学行为的影响,以及检测Wnt5a/ROR2信号通路中MMP-13蛋白的表达情况,为以Wnt5a信号通路为靶点的甲状腺乳头状癌治疗提供实验依据。方法:1.应用MTT实验检测敲低ROR2同时过表达Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞增殖能力的影响。2.应用平板克隆形成实验检测敲低ROR2同时过表达Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞克隆形成能力的影响。3.应用Transwell实验检测敲低ROR2同时过表达Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞侵袭能力的影响。4.应用Western blot实验检测敲低ROR2同时过表达Wnt5a对甲状腺乳头状癌细胞中MMP-13蛋白表达的影响。结果:1.MTT实验结果显示,敲低ROR2能够抑制甲状腺乳头状癌细胞株K1及BCPAP的增殖活性;同时,敲低ROR2可部分逆转过表达Wnt5a对K1和BCPAP细胞增殖能力的促进作用,差异有统计学意义(P<0.05)。2.平板克隆形成实验结果显示,敲低ROR2后,甲状腺乳头状癌细胞株K1及BCPAP的单细胞克隆形成能力被抑制;同时,敲低ROR2可部分逆转过表达Wnt5a对K1和BCPAP细胞克隆形成能力的促进作用,差异有统计学意义(P<0.05)。3.Transwell侵袭实验结果显示,敲低ROR2能够抑制甲状腺乳头状癌细胞株K1及BCPAP的体外侵袭能力;同时,敲低ROR2可部分逆转过表达Wnt5a对K1和BCPAP细胞侵袭能力的促进作用,差异有统计学意义(P<0.05)。4.Wnt5a能够引起甲状腺乳头状癌细胞株K1及BCPAP中MMP-13表达升高;敲低ROR2能够抑制甲状腺乳头状癌细胞中MMP-13表达;同时,敲低ROR2可部分逆转Wnt5a过表达引起的甲状腺乳头状癌细胞中MMP-13的表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.Wnt5a与ROR2在甲状腺乳头状癌中表达上调,且二者的表达水平具有正相关关系。2.Wnt5a与ROR2均能够促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖与侵袭能力。3.Wnt5a可能通过ROR2信号通路调控MMP-13的表达进而促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖与侵袭。