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提取并纯化多毛橐吾总黄酮,并对其抗炎活性及相关作用机制进行探究。以多毛橐吾为原料,用超声波法提取总黄酮,对超声功率、提取时间、乙醇体积分数、液料比、提取次数5个提取条件进行因素筛选,通过Design-Expert 8.05b软件分析得到最佳的提取工艺条件;用AB-8大孔吸附树脂对粗黄酮进行纯化,对上样质量浓度、上样量、上样流速、上样液pH值、洗脱液乙醇体积分数、洗脱液用量6个纯化条件进行因素筛选,通过正交试验分析得到最佳的纯化工艺条件;以大肠杆菌(Escherichia coli)为供试菌种,用纸片扩散法检测多毛橐吾总黄酮对大肠杆菌的抑菌程度;用脂多糖(LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞建立体外炎症模型,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)测定IL-6和TNF-α的分泌量,蛋白免疫印迹(Western blot)检测IκB-α蛋白及其磷酸化蛋白的表达水平,用以研究多毛橐吾总黄酮的抗炎活性作用及其对NF-κB信号转导通路调控的影响。试验结果如下:1.通过Design-Expert8.05b软件中Box-Behnken分析可知超声功率(A)、提取时间(B)、乙醇体积分数(C)及液料比(D)对多毛槖吾总黄酮的得率影响的主次顺序为B>C>D>A。总黄酮提取的最佳优化条件为:超声功率670 W,提取时间27 min,乙醇体积分数77%,液料比34:1(mL:g),提取次数2次,在此工艺下测得总黄酮得率为1.48%。2.正交试验结果分析可知,上样质量浓度(A)、上样pH(B)、上样量(C)对多毛槖吾总黄酮的吸附率影响的主次顺序排序为C>A>B。总黄酮纯化的最佳工艺条件为:上样质量浓度0.8 mg/mL,上样量30 mL,上样流速1 mL/min,上样液pH值3,乙醇体积分数90%,洗脱液用量40 mL,在此条件下得到的总黄酮的含量为67.3%。3.抑菌试验结果表明,多毛橐吾总黄酮溶液质量浓度在0.3125~5 mg/mL范围内对大肠杆菌的生长繁殖均起到了抑制作用。其中浓度范围在0.3125~1.25 mg/mL为低度抑菌;浓度范围在1.25~2.5 mg/mL为中度抑菌;浓度范围在2.5~5 mg/mL为高度抑菌。4.RT-PCR及ELISA试验结果显示,多毛橐吾总黄酮可下调TNF-α、IL-6 mRNA的表达及抑制TNF-α、IL-6的分泌。其中总黄酮质量浓度在25μg/mL、50μg/mL和100μg/mL时,TNF-α分泌量分别下降了37.4%、57.5%和79.1%,IL-6分泌量分别下降了57.7%、77.1%和88.3%,表明多毛橐吾总黄酮具有明显抗炎效果。5.Western blot试验结果显示,多毛橐吾总黄酮对IκB-α蛋白的磷酸化能起到抑制作用。其中总黄酮质量浓度在25μg/mL、50μg/mL和100μg/mL时,磷酸化IκB-α蛋白的表达量分别下降了10.7%,42.5%和48.8%。表明多毛橐吾总黄酮是通过抑制LPS诱导的NF-κB信号转导通路的活化而起到抗炎作用。