树突状细胞亚群在川崎病患儿外周血中的变化及临床意义

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目的:本研究通过检测川崎病(Kawasaki disease,KD)患儿急性期外周血循环中树突状细胞(dendritic cells,DC)亚群的改变,探讨其在KD发生发展中的可能作用。方法:1.通过流式细胞术检测KD患儿静脉注射免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)治疗前、后、发热对照组、健康对照组外周血循环中DC亚群浆细胞样 DC(plasmacytoid DC,pDC)和髓系来源 DC(myeloid DC,mDC)的比例及数目。2.通过流式细胞术检测KD患儿静脉注射IVIG治疗前、后和健康对照组外周血循环中pDC和CD1c+mDC表面功能分子HLA-DR、CD86和CD40的表达水平。3.通过流式细胞术检测KD患儿静脉注射IVIG治疗前、后和健康对照组外周血循环中pDC和CD1c+mDC凋亡水平。4.采用流式液相多重蛋白定量技术(Cytometric Bead Array,CBA)检测KD患儿静脉注射IVIG治疗前、后和健康对照组血浆炎症细胞因子表达水平,包括白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-17A(IL-17A)和白介素-10(IL-10)。Spearman相关性分析急性期KD患儿血浆炎症细胞因子与pDC和CD1c+mDC细胞数目的相关性。5.分析急性期KD患儿DC亚群pDC和CD1c+mDC与冠状动脉损伤(coronary artery lesion,CAL)、IVIG 无反应的关系。研究结果:1.急性期KD患儿pDC、CD1c+mDC占外周血总DC的比例和数目与发热对照组、健康对照组相比均显著降低(P<0.05);IVIG治疗后,pDC的比例与治疗前差异无统计学意义,但数目与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05),治疗后CD1c+mDC的比例和数目均增加,与治疗前差异有统计学意义(P<0.05);治疗后pDC、CD1c+mDC的比例均未达到健康对照组水平(P<0.05),而数目与健康对照组差异无统计学意义。2.急性期KD患儿外周血中pDC表面HLA-DR平均荧光强度(Mean fluorescence intensity,MFI)与健康对照组相比差异无统计学意义,CD1c+mDC表面HLA-DR MFI与健康对照组相比显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);IVIG治疗后,CD1c+mDC表面HLA-DR表达显著增加,与健康对照组差异无统计学意义。KD患儿急性期CD86、CD40占pDC的比例和MFI与健康对照组相比显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);IVIG治疗后,CD86、CD40占pDC的比例和MFI均显著增加,与治疗前差异有统计学意义(P<0.05);治疗后CD86占pDC的比例及MFI均恢复到健康对照组水平,而CD40占pDC的比例及MFI尚未恢复到健康对照组水平,差异有统计学意义(P<0.05);急性期KD患儿CD86占CD1c+mDC的比例和MFI与健康对照组相比均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),而CD40在CD1c+mDC的表达在KD患儿IVIG治疗前、后和健康对照组三组间差异无统计学差异;IVIG治疗后,CD86占CD1c+ mDC的比例和MFI均显著增加,与治疗前差异有统计学意义(P<0.05),然而治疗后尚未恢复到健康对照组水平(P<0.05)。3.KD组患儿急性期外周血中pDC、CD1c+mDC凋亡率与健康对照组相比均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);IVIG治疗后,pDC凋亡率有下降的趋势,但差异无统计学意义,CD1c+mDC凋亡率显著下降,与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05);治疗后pDC、CD1c+ mDC凋亡率均未恢复到健康对照组水平(P<0.05)。4.KD组患儿急性期血浆IL-2、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF-α和IFN-γ表达水平与健康对照组相比均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);IVIG治疗后,血浆IL-2、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF-α和IFN-γ表达水平较治疗前均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后IL-6、IL-10、IL-17A、TNF-α和IFN-γ还未恢复到健康对照组水平(P<0.05),而治疗后IL-2与健康对照组相比无统计学差异。将急性期KD外周血pDC与CD1c+mDC细胞数目与血浆细胞因子进行Spearman相关性分析,结果显示:急性期KD患儿外周血中pDC、CD1c+mDC细胞数目与IL-6水平均成负相关(P<0.05),而急性期KD患儿外周血pDC或CD1c+mDC细胞数目与血浆IL-2、IL-10、TNF-α、IFN-γ和IL-17A水平与未发现明显相关性。5.KD组急性期pDC和CD1c+mDC占外周血总DC比例、数目、表面功能分子(HLA-DR、CD86、CD40)在冠状动脉损伤组和无损伤组差异均无统计学意义。6.KD组患儿急性期IVIG无反应组pDC和CD1c+mDC比例与IVIG反应组无明显差别,而IVIG无反应组pDC和CD1c+mDC细胞数目均显著低于IVIG反应组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.急性期KD患儿外周循环中pDC和CD1c+mDC比例和数目明显降低,其表面抗原递呈分子(HLA-DR)或共刺激分子(CD86、CD40)表达水平降低,提示外周循环中pDC和CD1c+mDC可能处于不成熟的状态。2.急性期KD患儿pDC和CD1c+mDC凋亡增加,提示其数目减少可能与其凋亡增加有关。3.急性期 KD 患儿血浆中 IL-2、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF-α 和 IFN-γ 水平显著升高,并且血浆IL-6水平与pDC、CD1c+mDC细胞数目成显著负相关。IL-6在KD中可能不仅仅作为一种促炎性细胞因子,还可能与DC亚群从外周循环中向炎症组织迁移或DC凋亡有关,有待于我们接下来进一步去验证。4.急性期KD患儿外周循环中pDC和CD1c+mDC细胞数目可能与冠状动脉损伤无关,与IVIG无反应有关。
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