间充质干细胞促进人脐血造血干细胞在NOD/SCID小鼠模型植入的研究

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目的:构建人造血干细胞移植研究的小鼠模型,探讨人脐带来源的间充质干细胞(umbilical cord derived mesenchymal stem cell,UC MSC)在NOD/SCID小鼠模型中对人脐血造血干细胞植入的影响。方法:选用4-5周龄雌性NOD/SCID小鼠30只,经2.7Gy射线照射处理后随机分3组,对照组(8只)尾静脉注射0.2ml PBS,单移植组(11只)尾静脉注射人脐血单个核细胞3*10?6个(0.2ml),MSC共移植组(11只)尾静脉注射人脐血单个核细胞3*10?6个+MSC 1*10?6个(共0.2ml),6周后处死小鼠,制备小鼠骨髓细胞悬液及脾细胞悬液,流式细胞术检测人源CD45+细胞比例,分别检测骨髓细胞悬液中人源CD3+、CD14+、CD19+、CD33+、CD71+、CD34+细胞百分比;取骨髓细胞悬液用PCR法检测人源Alu基因表达;取小鼠髂骨制备骨髓病理切片,行HE染色,光学显微镜分析小鼠骨髓增生情况。结果:流式细胞术分析小鼠骨髓单个核细胞中人源CD45+细胞比例,对照组未检测到人源CD45+细胞,MSC共移植组为(71.83±4.96)%,显著高于单移植组(42.71±5.17)%,差异有统计学意义(P=0.0014);流式细胞术分析小鼠脾脏单个核细胞中人源CD45+细胞比例,单移植组为(37.25±8.12)%,MSC共移植组为(32.84±6.66)%,两组数据无显著差异(P=0.382);除对照组外,骨髓单个核细胞中均检测到不同比例的人源CD3+、CD14+、CD19+、CD33+、CD71+、CD34+细胞,单移植组分别为(2.17±0.36)%、(3.4±0.49)%、(60.28±1.94)%、(11.29±1.69)%、(1.3±0.35)%、(14.44±1.53)%,MSC共移植组分别为(1.87±0.33)%、(3.22±0.45)%、(63.84±4.22)%、(8.75±1.18)%、(1.19±0.27)%、(13.27±1.59)%,统计学分析两组数据均无显著差异;单移植组与MSC共移植组小鼠骨髓单个核细胞中均检测到人Alu基因表达。结论:1.本研究成功构建人造血干细胞移植的NOD/SCID小鼠模型。2.本研究所用山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司提供的人脐带来源的MSC对人脐血造血干细胞在NOD/SCID小鼠骨髓中的植入有促进作用,对植入造血干细胞向髓系、淋系、红系及巨核系的分化无明显影响;对人脐血造血干细胞在NOD/SCID小鼠脾脏的植入无明显影响。
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