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目的 内皮抑素（endostatin）是近几年发现的一种内源性血管内皮细胞增殖的强效抑制剂。研究发现内皮抑素能特异性抑制处于增殖状态的新生血管内皮细胞,并伴有诱导凋亡的作用。近年来,国内外学者对内皮抑素的研究主要集中在它对肿瘤的治疗作用,而在其它血管增生相关性疾病中的研究较少。角膜新生血管化（CNV）是临床上致盲的主要原因之一,也是角膜移植捧斥反应发生的高危因素,但目前尚无特效的治疗方法。本部分研究的目的是探讨毕赤酵母菌表达的重组分泌型内皮抑素对角膜新生血管的抑制作用。 材料与方法 1.利用RT-PCR技术从人胎肝中获得人endostatin cDNA,经T-A克隆制备含有人endostatin基因的克隆质粒（pGEM-En）; 2.利用酵母分泌型表达载体pGAPZaA构建含有人endostatin基因的重组质粒(pGAPZ?A-En),经电转化导入毕赤酵母菌GS115株; 3.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选阳性重组子,经Western Blot鉴定;利用Heparin亲和层析柱进行纯化后,在体外利用MTT法检测重组内皮抑素对人脐静脉内皮细胞ECV-304的生长抑制作用; 4.利用角膜缝线法和碱烧伤法制备兔角膜新生血管动物模型,分别在角膜缝线后和碱烧伤后第一天给予球结膜下注射重组内皮抑素0.2ml,隔日一次,共8次。治疗后分别在术后第4、7、10、13天用双脚规测量新生血管长度,用数码相机定位拍摄照片,输入计算机进行图象分析。并于第16天,处死上述兔,取眼球及全身重要脏器（心、肝、肾、脾、肺）送病理检测。在用药后同时观察球结膜是否充血、水肿,角膜有无混浊水肿及全身状况。并利用免疫组化法检测VEGF的表达,在显微镜下观察微血管的数量。 结果 1.经PCR扩增成功构建的克隆载体（pGEM-En）及表达载体（pGAPZaA-En）,