目的:通过观察人脐带间充质干细胞对早期糖尿病视网膜病变大鼠视网膜紧密连接蛋白及炎症因子的影响来探索其对BRB损伤的保护作用。方法:组织块贴壁培养法分离、培养人脐带间充质干细胞(HUCMSC),流式细胞学方法鉴定。将健康清洁级雄性SD大鼠70只,随机分为正常对照组15只,糖尿病(DM)组55只。经腹腔注射链脲佐菌素STZ(60mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,并定期观察体重和血糖变化。DM成模后第1、3、5月行各组伊文思蓝(EB)灌注视网膜铺片,糖尿病视网膜病变(DR)模型成立后将剩余DM组大鼠分为DR组、DR+PBS组、DR+HUCMSC组。DR+HUCMSC组经尾静脉注射1ml第四代HUCMSC,DR+PBS组经尾静脉注射1ml PBS,DR组不作任何处理,观察1月后全部处死。伊文思蓝视网膜铺片观察各组血管形态及通透性变化;免疫组织化学、Western-blot检测血管紧密连接蛋白Occludin的表达;ELISA检测视网膜血管通透性相关的炎症因子TNF-α、ICAM-1及VEGF的含量。结果:1.从人脐带中可分离培养干细胞(MSC),细胞表面表达CD73,CD90等干细胞标志物,而CD34,CD45及HLA-DR表达为阴性。2.EB灌注视网膜血管铺片:正常组血管走行良好,DM5月时,血管走行迂曲、僵硬,管腔粗细不均,可见EB渗漏、微血管瘤及无血管灌注区形成。HUCMSC干预后1个月,血管渗漏减轻。DR组血管渗漏量较正常组增加(P<0.05),HUCMSC干预后,可降低DR大鼠的血管通透性,与DR组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。3.免疫组织化学染色及Western-blot检测Occludin蛋白:正常组大鼠视网膜微血管管壁有棕黄色环状着染,DR组及DR+PBS组视网膜微血管棕黄色颗粒变浅,范围减少,DR+HUCMSC组视网膜微血管壁颜色较DR组加深。Western-blot结果显示DR及DR+PBS两组Occludin蛋白量明显下调,较正常组视网膜组织中的Occludin蛋白的表达量明显减少(P<0.05),MSC干预后,Occludin蛋白表达量较两组均增加,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。4.ELISA结果:在DR及DR+PBS两组中,视网膜中的VEGF、ICAM-1、TNF-α三种因子水平出现不同程度的上调;DR+HUCMSC组视网膜中的VEGF、ICAM-1、TNF-α水平均出现下调,与DR组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。且ICAM-1与VEGF的表达具有正相关。结论:1.从人脐带中可以分离出人脐带间充质干细胞,且细胞纯度较高,形态均一,成长梭形,表达干细胞特异性抗原标志,体外扩增能力强。2.DM成模5个月,可以诱导出明显的早期DR血管病变模型,出现微血管瘤及荧光素渗漏。3.尾静脉注射人脐带间充质干细胞可通过增加紧密连接蛋白Occludin的水平来减少血视网膜屏障的破坏。4.尾静脉注射人脐带间充质干细胞可通过减少视网膜中炎症因子TNF-α、ICAM-1及VEGF的过表达进一步保护血视网膜屏障免受损伤。