黑曲霉中纤维二糖转运蛋白的鉴定

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多数纤维素降解真菌同时存在纤维素的完全降解机制和部分降解机制。黑曲霉是一种重要的纤维素降解工业菌,能高效分泌β-葡萄糖苷酶到胞外,快速降解纤维二糖生成葡萄糖。目前尚未证实黑曲霉能否直接转运纤维二糖。本论文旨在证实黑曲霉中纤维二糖转运蛋白的存在,为深入阐明黑曲霉高效利用纤维素的机理、解析胞内6种β-葡萄糖苷酶基因的功能提供依据。本文采用不能以纤维二糖为唯一碳源进行生长的酿酒酵母YP-βG作为出发菌株。酵母YP-βG含有胞内β-葡萄糖苷酶,但不能转运纤维二糖到胞内进行利用。因此,可以将候选纤维二糖转运蛋白在菌株YP-βG中表达,通过检测重组酵母YP-βG-CT能否在纤维二糖培养基上正常生长,来判断其是否具有转运纤维二糖的能力。实验主要结果如下:1通过生物信息学分析和不同碳源条件下候选转运蛋白基因转录水平的,在黑曲霉B2中预测了3个纤维二糖转运蛋白候选蛋白:An CT79、An CT26和An CT46。2在酿酒酵母YP-βG中成功表达An CT79、An CT26和An CT46,其中重组菌株YP-βGCT79可以利用纤维二糖为唯一碳源正常生长,初始糖含量为0.5%(w/v)时纤维二糖的平均消耗速率为34.4 mg/L?h。初步证实An CT79蛋白为黑曲霉B2菌株的纤维二糖转运蛋白。而蛋白An CT26和An CT46不具有转运纤维二糖的能力。3酿酒酵母YP-βG-CT79可以转运纤维三糖、纤维四糖和纤维五糖,说明An CT79蛋白具有纤维寡糖转运蛋白的功能。黑曲霉B2中纤维二糖转运蛋白An CT79的存在为黑曲霉直接转运纤维二糖到胞内利用提供了依据,初步证实了黑曲霉存在部分降解机制,同时也暗示6种胞内β-葡萄糖苷酶基因可能在黑曲霉中功能性表达,为解析黑曲霉高效利用纤维素的机理及酶诱导机制的研究奠定了基础。
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