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目的:研究骨碎补中的两种植物雌激素成分山奈酚和木犀草素对Aβ25-35致PC-12细胞损伤的保护作用及其分子机制,从分子生物学水平探讨中药植物雌激素对PC-12细胞ER/MAPK信号通路的调控机制,为中药植物雌激素治疗AD提供理论依据。方法:应用浓度分别为 5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的Aβ25-35对PC-12细胞进行损伤,倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定PC-12细胞的损伤率,确定出能够引起细胞损伤的最佳浓度和最适时间,并以此为基础,以不同浓度的山萘酚(10μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、10-2μmol/L、10-3μmol/L、10-4μmol/L、10-5μmol/L、10-6μmol/L)和木犀草素(10μmol/L、1μmol/L、10-1μmol/L、10-2μmol/L、10-3μmol/L、10-4μmol/L、10-5μmol/L、10-6μmol/L)作用于PC-12细胞,以此来研究山萘酚和木犀草素在Aβ25-35致使PC-12细胞损伤中所起的保护作用。采用western blot法检测 PC-12 细胞 ERα、ERβ、ERK1/2、Bcl-2、Bax 及 Caspase-3蛋白的表达;采用RT-PCR法检测PC-12细胞ERβ、Bcl-2、Bax及Caspase-3 mRNA的表达,进一步探讨两种植物雌激素对细胞凋亡的保护作用及可能机制。结果:在4个Aβ25-35浓度组中,浓度为20μmol/L组处理细胞24h后可发现其抑制PC-1 2神经细胞的生长的作用非常明显,给予相应的药物处理后,细胞的状态可以恢复如常,故选用此浓度作为AD体外模型的制备浓度。与空白组相比,Aβ25-35损伤的PC-12细胞增殖率显著降低(P<0.01);与模型组相比,山奈酚(10-2μmol/L)和木犀草素(10-4μmol/L)可显著提高PC-12细胞的增殖率(P<0.01)。与空白组相比,Aβ25-35损伤的PC-12细胞ERβ、p-ERK1/2以及Bcl-2蛋白的表达显著减少(P<0.01),Caspase-3和Bax蛋白的表达显著增加(P<0.01);与模型组相比,山奈酚(10-2μmol/L)和木犀草素(10-4μmol/L)可显著上调Aβ25-35损伤细胞中ERβ、p-ERK1/2和Bcl-2蛋白的表达(P<0.01),显著下调Caspase-3和Bax蛋白的表达(P<0.01);与给药组相比,给予ER拮抗剂Fulvestrant或ERK阻断剂U0126,山奈酚(10-2μmol/L)和木犀草素(10-4μmol/L)促进Bcl-2、p-ERK1/2,以及抑制Bax和Caspase-3蛋白表达的作用显著降低(P<0.01)。山奈酚(10-2μmol/L)和木犀草素(10-4μmol/L)对细胞ERβ、Caspase-3、Bax、Bcl-2mRNA表达的影响与蛋白结果的趋势一致。结论:山奈酚和木犀草素可选择性作用于ERβ,促进p-ERK1/2的表达,激活细胞ER/MAPK信号转导通路,并通过该途径促进Bcl-2蛋白的表达,抑制Caspase-3和Bax蛋白的表达,阻止PC-12细胞启动凋亡程序,从而对受Aβ25-3 5损伤的PC-12细胞产生保护作用。