【摘 要】
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目的:作为中药植物红景天主要活性成分之一的红景天苷(Salidroside,SAL),在诸多疾病中发挥较好地抗氧化作用,但目前其在椎间盘退变中抗氧化作用暂未得到验证。以往的研究发现炎性环境可引起组织内ROS增多从而发生氧化应激,进一步恶化椎间盘微环境,引起椎间盘退变。因此寻找有效的抗氧化激动剂可在一定程度上缓解椎间盘退变。本课题旨在探究红景天苷缓解椎间盘退变的潜在机制。方法:在体外实验部分,本实验
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目的:作为中药植物红景天主要活性成分之一的红景天苷(Salidroside,SAL),在诸多疾病中发挥较好地抗氧化作用,但目前其在椎间盘退变中抗氧化作用暂未得到验证。以往的研究发现炎性环境可引起组织内ROS增多从而发生氧化应激,进一步恶化椎间盘微环境,引起椎间盘退变。因此寻找有效的抗氧化激动剂可在一定程度上缓解椎间盘退变。本课题旨在探究红景天苷缓解椎间盘退变的潜在机制。方法:在体外实验部分,本实验通过分离7名(4男,3女)于天津医科大学总医院脊柱外科行颈椎前路椎间盘切除融合术(ACDF)患者的髓核组织,按髓核组织原代细胞提取方法培养髓核细胞,经传代培养至第2代后进行实验。先运用CCK-8法验证红景天苷(浓度为10,20,50,100,150mM)在髓核细胞中的细胞毒性。随后将实验分为3组:正常组、TNF-α组、SAL+TNF-α组,经不同处理后使用免疫印迹法(Western blotting,WB)检测COX-2、i NOS两种炎性介质,CollagenⅡ、Aggrecan、MMP13、ADAMTS4等髓核细胞胞外基质代谢关键蛋白及Nrf2/ARE抗氧化信号通路中核内Nrf2和下游分子HO-1蛋白表达情况。在体内实验部分,本实验将18只雄性SD大鼠(体重200±10g)随机分为3组:Control组、IDD组、SAL+IDD组。IDD组、SAL+IDD组行针刺椎间盘致退变,SAL+IDD组在穿刺前连续3天腹腔注射SAL(25mg/kg),针刺后每周规律注射SAL 3次,持续1个月;IDD组则注射等量生理盐水。于针刺后1个月对3组大鼠行核磁共振检查,检查完毕后对针刺所属节段的3组标本进行HE及SO组织染色,根据对应量表评价IDD情况。结果:我们发现红景天苷在预设的浓度范围内无明显细胞毒性;TNF-α可引起COX-2、i NOS两种炎性介质表达上调,而经红景天苷预处理的髓核细胞炎性介质表达明显降低,表明红景天苷具有一定的抗炎作用;我们还发现红景天苷能明显改善髓核细胞经TNF-α刺激后胞外基质(CollagenⅡ、Aggrecan)的表达降低,并能对TNF-α刺激后胞外基质降解关键酶类(MMP-13、ADAMTS-4)的过表达有显著抑制作用;另外,经红景天苷预处理的髓核细胞,其核内Nrf2及下游靶蛋白HO-1的表达水平明显上调。最后,在体内动物实验部分的结果表明红景天苷治疗组较退变组的核磁共振T2加权信号明显有所升高,同时组织学评分相应地降低,该结果说明体内应用红景天苷对于椎间盘退变具有一定保护作用。结论:红景天苷可通过激活Nrf2/ARE信号通路,对抗ROS介导的氧化应激,有效地减轻TNF-α诱导的炎性介质表达增加及ECM降解。另外,腹腔注射红景天苷对椎间盘退变也具有一定缓解作用。本研究或许可为红景天苷治疗IDD提供理论参考和实验依据。
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