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目的：2型糖尿病（Type2Diabetes mellitus，T2DM）血清能损伤人脐静脉内皮细胞株（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVECs），同时伴有上清中（Amyloid-β，Aβ）40和Aβ42水平的升高，而Aβ40可诱导HUVECs损伤。本研究为进一步探讨Aβ40和Aβ42与T2DM大血管病变的关系，及Aβ42对血管内皮损伤的作用和机制。方法：1.选取T2DM患者78例，分为单纯T2DM组（Isolated T2DM group，IDM组）（n=38）和T2DM合并大血管病变组（T2DM with Macroangiopathy group，DMA组）（n=40）；选取健康对照组（Health Control group，HC组）（n=40）。所有研究对象入组后均进行全面的体格检查，测量身高、体重、腰围（waist circumference，WC）、收缩压（Systolic Blood Pressure，SBP）和舒张压（diastolic blood pressure，DBP），计算体重指数（body mass index，BMI）；隔夜空腹12h采肘静脉血，测定空腹静脉血浆葡萄糖（fasting plasma glucose，FPG）、糖化血红蛋白A1（Cglycosylatedhemoglobin A1C，HbA1C）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglycerid，TG）和低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）；ELISA法测定血清Aβ40、Aβ42。2. Aβ42诱导HUVECs损伤30min、3h、3d后，倒置显微镜观察细胞形态学变化；四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法检测3d时Aβ42（0.005μM、0.05μM、0.5μM、5μM、50μM）作用细胞的增殖情况，并从中筛选出最适损伤浓度。3.分别用终浓度为0.5μM和5μM的Aβ42诱导HUVECs损伤30min、3h、3d，留取各时间点的细胞培养上清液，化学比色法测定乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LDH）活性、硫代巴比妥酸法测定丙二醛（maleic dialdehyd，MDA）含量、黄嘌呤氧化酶法测定总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力、硝酸还原酶法测定一氧化氮（nitric oxide，NO）含量。4.取各时间点内皮细胞，应用Real time-RT PCR法检测晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end-products，RAGE）mRNA表达水平、WesternBlot法检测RAGE蛋白表达水平。结果：1.各组间临床资料比较：IDM组FPG（P=0.000）、HbA1C（P=0.002）、BMI（P=0.012）、WC（P=0.006）高于HC组，DMA组FPG（P=0.000）、HbA1C（P=0.003）、BMI（P=0.000）、WC（P=0.000）、SBP（P=0.000）、DBP（P=0.000）、TC（P=0.010）、TG（P=0.000）、LDL-C（P=0.001）高于HC组，DMA组FPG（P=0.004）、WC（P=0.005）、SBP（P=0.000）、DBP（P=0.001）、TG（P=0.000）、LDL-C（P=0.016）高于IDM组。各组间血清Aβ40、Aβ42水平比较：与HC组比较，IDM组（P=0.002）和DMA组（P=0.000）Aβ40水平均升高，且DMA组Aβ40水平高于IDM组（P=0.000）；Aβ42在各组间差异均无统计学意义（P>0.05）。2.细胞形态学改变：对照组为正常内皮细胞形态，呈多角形，细胞边界清楚，细胞融合成片，呈单层铺路石状排列。30min和3h时各组细胞形态未见明显变化，3d时Aβ4250μM组可见细胞数减少，细胞间隙增大，细胞边界较模糊，细胞胞体肿胀，细胞排列紊乱，其他浓度组未见明显变化。3.3d时各浓度组细胞生存率：与正常对照组比较，0.005μM组和0.05μM组差异无统计学意义（P＞0.05），0.5μM、5μM和50μM组细胞生存率均明显下降（P=0.000），以50μM组下降为著；0.05μM组和0.005μM组比较差异无统计学意义（P>0.05）；0.5μM组和5μM组比较差异无统计学意义（P>0.05）；50μM组与其他各组比较细胞生存率均显著下降（P=0.000），但生存率过低，故本研究选用0.5μM和5μM用于内皮损伤效应评定。4. LDH活性：相同时间点各组间比较：30min时，各组间差异均无统计学意义（P>0.05）；3h时，与对照组比较，0.5μM组（P=0.001）和5μM组（P=0.000）LDH活性均明显升高，以5μM组升高为著；3d时，与对照组比较，0.5μM组（P=0.000）和5μM组（P=0.000）LDH活性均明显升高，以5μM组升高为著。3h和3d时，与0.5μM组比较，5μM组LDH活性均升高（P=0.034，0.004），呈一定的浓度依赖性。相同浓度组内不同时间点间比较：对照组内，各时间点间差异无统计学意义（P>0.05）；0.5μM组内，3h较30min LDH活性升高（P=0.000），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.018）LDH活性均明显升高；5μM组内，3h较30min LDH活性升高（P=0.000），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.002）LDH活性均明显升高。0.5μM组和5μM组，随着时间延长LDH活性升高呈一定的时间依赖性。5. MDA含量：相同时间点各组间比较：30min时，各组间差异均无统计学意义（P>0.05）；3h时，与对照组比较，0.5μM组（P=0.001）和5μM组（P=0.000）MDA含量均明显升高，以5μM组升高为著；3d时，与对照组比较，0.5μM组（P=0.000）和5μM组（P=0.000）MDA含量均明显升高，以5μM组升高为著。3h和3d时，与0.5μM组比较，5μM组MDA含量均升高（P=0.018，0.022），呈一定的浓度依赖性。相同浓度组内不同时间点间比较：对照组内，各时间点间差异无统计学意义（P>0.05）；0.5μM组内，3h较30min MDA含量升高（P=0.032），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.000）MDA含量均明显升高；5μM组内，3h较30min MDA含量升高（P=0.000），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.000）MDA含量均明显升高。0.5μM组和5μM组，随着时间延长MDA含量升高呈一定的时间依赖性。6. SOD活力：相同时间点各组间比较：30min时，各组间差异均无统计学意义（P>0.05）；3h时，与对照组比较，0.5μM组（P=0.003）和5μM组（P=0.000）SOD活力均明显下降，以5μM组下降为著；3d时，与对照组比较，0.5μM组（P=0.000）和5μM组（P=0.000）SOD活力均明显下降，以5μM组下降为著。3h和3d时，与0.5μM组比较，5μM组SOD活力均下降（P=0.042，0.023），呈一定的浓度依赖性。相同浓度组内不同时间点间比较：对照组内，各时间点间差异无统计学意义（P>0.05）；0.5μM组内，3h较30min SOD活力下降（P=0.003），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.001）SOD活力均明显下降；5μM组内，3h较30min SOD活力下降（P=0.000），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.001）SOD活力均明显下降。在0.5μM组和5μM组内，随着干预时间延长SOD活力下降呈一定的时间依赖性。7. NO含量：相同时间点各组间比较：30min时，各组间差异均无统计学意义（P>0.05）；3h时，与对照组比较，0.5μM组（P=0.000）和5μM组（P=0.000）NO含量均明显下降，以5μM组下降为著；3d时，与对照组比较，0.5μM组（P=0.000）和5μM组（P=0.000）NO含量均明显下降，以5μM组下降为著。3h和3d时，与0.5μM组比较，5μM组NO含量均下降（P=0.000，0.047），呈一定的浓度依赖性。相同浓度组内不同时间点间比较：对照组内，各时间点间差异均无统计学意义（P>0.05）；0.5μM组内，3h较30min NO含量下降（P=0.000），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.000）NO含量明显下降；5μM组内，3h较30min NO含量下降（P=0.000），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.000）NO含量均明显下降。0.5μM组和5μM组，随着干预时间延长NO含量下降呈一定的时间依赖性。8. RAGE mRNA的表达：相同时间点各组间比较：30min时，各组间差异均无统计学意义（P>0.05）；3h时，与对照组比较，0.5μM组（P=0.038）和5μM组（P=0.000）RAGE mRNA表达均增强，以5μM组为著；3d时，与对照组比较，0.5μM（P=0.000）和5μM组（P=0.000）RAGE mRNA表达均明显增强，以5μM组为著。3h和3d时，与0.5μM组比较，5μM组RAGE mRNA表达均增强（P=0.025，0.000），呈一定的浓度依赖性。相同浓度组内不同时间点间比较：对照组内，各时间点间差异无统计学意义（P>0.05）；0.5μM组内，3h和30min比较差异无统计学意义（P>0.05），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.000）RAGE mRNA表达均明显增强；5μM组内，3h较30minRAGE mRNA表达增强（P=0.003），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.000）RAGEmRNA表达均明显增强。0.5μM组和5μM组，随着时间延长RAGE mRNA表达增强呈一定的时间依赖性。9. RAGE蛋白的表达：相同时间点各组间比较：30min时，各组间差异均无统计学意义（P>0.05）；3h时，与对照组比较，0.5μM组（P=0.000）和5μM组（P=0.000）RAGE表达均增强，以5μM组为著；3d时，与对照组比较，0.5μM（P=0.000）和5μM组（P=0.000）RAGE表达均明显增强，以5μM组为著。3h和3d时，与0.5μM组比较，5μM组RAGE表达均增强（P=0.002，0.000），呈一定的浓度依赖性。相同浓度组内不同时间点间比较：对照组内，各时间点间差异无统计学意义（P>0.05）；0.5μM组内，3h较30min RAGE表达均明显增强（P=0.000），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.000）RAGE表达均明显增强；5μM组内，3h较30minRAGE表达增强（P=0.000），3d较30min（P=0.000）和3h（P=0.000）RAGE表达均明显增强。0.5μM组和5μM组，随着时间延长RAGE表达增强呈一定的时间依赖性。结论：1. T2DM患者血清中Aβ40水平升高，T2DM合并大血管病变患者的Aβ40水平升高更为显著。Aβ40可能参与了T2DM及其大血管病变的发生、发展过程。2. Aβ42对内皮细胞有损伤作用，表现在LDH释放增加、MDA生成增多、SOD活力下降以及NO合成减少，且呈现一定的浓度、时间依赖性，损伤机制可能与氧化应激有关。3. Aβ42诱导内皮细胞损伤的同时伴有RAGE mRNA和蛋白表达水平的升高，并呈现一定浓度、时间依赖性。说明Aβ42可能通过RAGE诱导氧化应激损伤内皮，阻断其中某环节可能发挥内皮保护作用。