【摘 要】
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本实验室筛选到一株壳聚糖酶产生菌株JH01,能产生活性较强的壳聚糖酶。本研究以JH01为出发菌株,对壳聚糖酶的产酶影响因素、纯化、以及酶学性质进行系统的研究,结果如下:通过对该壳聚糖酶产生菌进行形态学研究,鉴定该菌株为半知菌亚门丝孢目从梗孢科曲霉属华丽曲霉(Aspergillus ornatus)。通过对影响华丽曲霉JH01产壳聚糖酶的单因素分析,得到液态发酵生产壳聚糖酶的最适产酶条件为:A1 1
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本实验室筛选到一株壳聚糖酶产生菌株JH01,能产生活性较强的壳聚糖酶。本研究以JH01为出发菌株,对壳聚糖酶的产酶影响因素、纯化、以及酶学性质进行系统的研究,结果如下:通过对该壳聚糖酶产生菌进行形态学研究,鉴定该菌株为半知菌亚门丝孢目从梗孢科曲霉属华丽曲霉(Aspergillus ornatus)。通过对影响华丽曲霉JH01产壳聚糖酶的单因素分析,得到液态发酵生产壳聚糖酶的最适产酶条件为:A1 1.5%,B5 1.0%,起始pH5.5,接种量15%,500mL摇瓶装量150mL,培养温度36℃,160r/min培养60h。培养基及培养条件优化后酶活力最高达26.03U/mL。通过蔗糖浓缩、DEAE Cellulose 52柱层析,从华丽曲霉JH01发酵粗酶液中分离纯化得到壳聚糖酶,经SDS-PAGE鉴定分子量约为30kDa。以壳聚糖为底物,对该酶的部分酶学性质进行了研究,结果表明:纯化后的壳聚糖酶为内切酶,有较好的耐高温性,在55~70℃之间保温30 min酶活保存70%以上,80℃保温30 min酶活力仍保留40%,酶的最适反应温度为60℃。壳聚糖酶在pH3.5~7.0之间保持稳定,在碱性范围内不稳定,最适反应pH为4.0。Cu2+、Zn2+、Hg2+对壳聚糖酶有强烈的抑制作用,Fe3+、CO2+、K+表现出较弱的抑制作用,而Ca2+有一定的激活作用。EDTA和硫脲对壳聚糖酶活力影响不大,表面活性剂SDS对酶活影响较大,使酶活丧失80%以上。NBS浓度增大,酶活降低。以壳聚糖为底物的米氏常数Km=4.16g/L,最大反应初速度为5.0736 mmol·L-1min-1。该壳聚糖酶只能降解壳聚糖,不能降解几丁质、羧甲基纤维素及微晶纤维素。
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