【摘 要】
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本论文从日本食品纳豆中分离出具有纤溶酶活性的菌株11株，并进行生理生化性质鉴定，鉴定其为枯草芽孢杆菌。通过液体发酵比较各菌株的产纤溶酶的活力，挑选出活性较高的菌株N-06，并
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本论文从日本食品纳豆中分离出具有纤溶酶活性的菌株11株，并进行生理生化性质鉴定，鉴定其为枯草芽孢杆菌。通过液体发酵比较各菌株的产纤溶酶的活力，挑选出活性较高的菌株N-06，并对其进行发酵条件优化。最佳液体发酵的碳源、氮源、碳氮比的组成以及装液量和发酵初始pH值：葡萄糖1.5％，蛋白胨1.5％，碳氮比1：1，装液量50mL/250mL，发酵初始pH6.5。
利用氯化苄方法从野生菌纳豆枯草杆菌N-06中提取了基因组DNA。PCR的方法将纳豆激酶基因(NK-1)扩增出来，并最终使NK-1基因在巴斯德毕赤酵母(P.pastorisGS115)中成功表达出具有活性的纳豆激酶。
PCR扩增出纳豆激酶与泛素融合基因Ubi-NK-2，将Ubi-NK-2基因PCR产物克隆至pMD18-T载体中，获得重组质粒pMD18T/Ubi-NK-2，并转入大肠杆菌JM109。
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