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目的:通过检测多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)模型大鼠卵巢组织肾素-血管紧张素系统(rennin angiontensin system,RAS)的两个轴系ACE-AngⅡ-AT1/AT2轴及ACE2-Ang(-1-7)-MAS轴血管紧张素受体的表达水平,观察其与正常大鼠卵巢组织表达的不同及相互关系,以期为多囊卵巢综合征的发病机理、治疗途径提供一个新思路。方法:1实验动物及分组1.1实验动物85日龄左右(体重180±10g)健康清洁雌性Spragu Dawley(SD)大鼠40只,购自河北医科大学动物中心,合格证编号:1111063。(见Fig.1)1.2随机分组对照组20只,模型组20只。2实验方法2.1动物模型制备模型组采用Poretsky法建立PCOS大鼠模型,每日颈背皮下注射3IU注射用人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin hormone,HCG)2次,第1天至第10天分别注射剂量递增的中效胰岛素,由0.5IU/天递增至6.0IU/天,以后每天固定剂量注射6.0IU,22天后检测大鼠血睾酮和胰岛素水平增高以及阴道涂片持续出现角化细胞者符合PCOS模型。对照组同期皮下注射生理盐水。3标本采集及测定3.1标本采集抽取大鼠心脏血,分离血清,测定血清激素水平;打开大鼠腹腔,观察双侧卵巢和子宫的大体形态,分别测量双侧卵巢湿重,取一部分卵巢和子宫组织以4%多聚甲醛固定,用于临床病理诊断。另一部分用生理盐水冲洗干净,装入EP管,迅速放入液氮中,随后转入-80℃冰箱中保存,以备后续RNA的提取。(见Fig.2,3)3.2标本测定光学显微镜观察HE染色子宫内膜及卵巢组织大体形态变化;荧光定量PCR方法检测AT1, AT2及Mas的mRNA在大鼠卵巢组织上的表达情况。结果:模型组大鼠在采用Poretsky法造模22天后检测血睾酮和胰岛素水平增高以及阴道涂片持续出现角化细胞者为造模成功的PCOS大鼠,共计17只,造模成功率为85.0%。1激素水平的变化二组大鼠血清T与INS水平分别为:对照组T(4.01±7.62)nmol/L, INS(6.93±2.81)U/L。模型组T(13.17±12.25)nmol/L, INS(28.59±5.32)U/L。模型组血清T及INS水平较对照组明显增高(P<0.01)。(见Table1)2卵巢湿重变化经电子天平测定,二组大鼠卵巢湿重分别为:对照组(0.0258±0.0017)g,模型组(0.1306±0.0094)g。模型组大鼠卵巢湿重与对照组相比明显增加(P<0.01)。(见Table2)3卵巢的形态学变化对照组大鼠卵巢组织色泽红,可见黄体;镜下可见多个黄体及不同发育阶段的各级卵泡,其中优势卵泡可见8~9层颗粒细胞。模型组卵巢组织为淡红色,体积增大,极少见黄体形成;镜下可见卵泡囊性扩张,未见卵母细胞及放射冠等基本结构,仅见1~2层颗粒细胞及大量闭锁卵泡。(见Fig.4)4子宫内膜的形态学变化对照组大鼠子宫组织色泽鲜润;镜下可见子宫内膜腺体数量较多,腺腔大而多褶,呈簇状排列,腺上皮中可见分泌泡。模型组子宫组织略显充盈;镜下可见子宫内膜腺体数目明显减少,腺腔小而直,排列较分散。(见Fig.5)5RT-PCR法检测AT1,AT2及MAS mRNA的表达结果5.1AT1mRNA的表达PCOS组及对照组大鼠卵巢组织AT1mRNA的表达结果分别为0.87±0.12,0.43±0.20。 PCOS组大鼠卵巢组织AT1mRNA水平明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.01)。(见Table3)5.2AT2mRNA的表达PCOS组及对照组大鼠卵巢组织AT2mRNA的表达结果分别为0.85±0.16,0.53±0.17。 PCOS组大鼠卵巢组织AT2mRNA水平明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.01)。(见Table4)5.3MAS mRNA的表达PCOS组及对照组大鼠卵巢组织MAS mRNA的表达结果分别为0.69±0.29,0.38±0.28。 PCOS组大鼠卵巢组织MAS mRNA水平明显高于对照组,且差异存在统计学意义(P<0.05)。(见Table5)结论: PCOS大鼠模型卵巢组织AT1,AT2及MAS分子水平表达增强,可能干扰卵巢正常生理功能如滤泡形成、性激素合成、卵母细胞成熟及排卵,参与PCOS的病理过程。