蔷薇属开花基因RoKSN和RoFT的序列多样性研究

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蔷薇属植物是最为重要的观赏植物之一,月季就有花中皇后的佳誉,现代月季的培育也离不开野生蔷薇。中国蔷薇属部分野生种、古老月季都为现代月季的培育提供了诸如连续开花、茶香、重瓣等重要观赏性状。蔷薇属植物有着丰富的开花时间多样性。已有研究表明RoFT与TFL1是蔷薇属植物重要的开花基因。为此,我们提出假设:(1)RFT的基因组序列多样性与蔷薇属植物的开花多样性相关;(2)RoKSN的等位基因类型和蔷薇属开花类型相对应;(3)RFT基因在月季选育过程中经历了较强的人工选择压力。就此问题,我们开展了以下研究:通过获得中国蔷薇属野生种、古老月季品种、民间栽培品种以及现代月季品种中的RoKSN位点的等位基因类型,检验和发掘RoKSN等位基因多态性和蔷薇属植物开花习性多样性间的相关性。结合PCR产物测序及克隆测序方法,获得149份材料的RoFT全长,进行基因多样性分析,发掘RoFT基因单核苷酸多态性与不同蔷薇属植物开花表型的相关性,发现RoFT基因在蔷薇属植物中的多态性分布,为进一步解析RoFT与TFL1在蔷薇属开花中的功能奠定基础。研究结果如下:(1)63个野生种的编码区中发现多态性位点44个,核苷酸多态性指数为0.00731,55个古老月季品种中发现多态性位点19个,核苷酸多态性指数0.00356。19个民间栽培品种与12个现代月季品种中发现的多态性位点分别为19、12个,他们的核苷酸多态性指数分别为0.00577、0.00587。选取材料的野生种群体、古老月季群体、民间栽培群体、现代月季群体的单倍型个数分别为38、18、12、7。(2)RFT基因DNA序列变异性及其连续开花性状的关联性分析显示,结果显示RoFT基因里的同义突变在各群体之间没有明显差异,RoFT基因的CDS序列211~213bp处的异义突变位点则为正向选择,并且与拥有连续开花习性的材料相关联。(3)基于RoFT基因的系统发育分析表明:四个类群间RoFT基因的差异性很小,聚类结果与传统分类结果不一致。连续开花的古老月季’青莲学士’与连续开花的’七姊妹’,月季组的粉团月季、玫红香水月季等聚为一类。连续开花的古老月季品种’软香红’也与非连续开花的大花香水月季、多花香水月季、腺叶蔷薇等聚类到一起。野生种钝叶蔷薇、丽江蔷薇(单瓣)与古老月季品种’雪中炭’、’大富贵’、’屏东月季’、’思春’等聚类在同一类群。(4)PCR扩增结果确定了 91份材料的RoKSN等位基因型。Copia/Copiaa基因型除’金边玫瑰’外,均表现出连续开花的行为。经鉴定RoKSN等位基因型为WT/LTR的材料中,古老月季品种’大叶藤本月月红’、’小叶藤本月月红’、’青莲学士’、’大富贵’、’金沙罗’等有连续开花习性。鉴定为Copia/LTR的民间品种’平阴玫瑰’为非连续开花表型。
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