金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起多种人畜共患病和食物中毒的常见病原菌。抗生素是治疗由细菌引起的各类疾病的有效药物,然而,随着抗生素的大量使用,细菌的耐药性逐渐增强。耐药金黄色葡萄球菌,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)已经成为临床治疗的重要难题。耐药菌可以通过食物链广泛传播,最终危害人类健康。对食品中金黄色葡萄球菌的耐药性进行监测并对其耐药机理进行研究具有十分重要的意义。鉴于以上原因,本论文的主要研究内容及结果如下:　　一、收集并整理135株金黄色葡萄球菌食品分离株,食品样品来自上海市各大农贸市场及超市、市郊奶牛场,食品种类涉及生奶、生鲜肉、果蔬、速冻食品等。根据2012年美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准M100-S22,采用纸片扩散法测定以上分离株对18种抗生素的药物敏感性情况。采用头孢西丁纸片法进行MRSA菌株的初筛。结果显示,135株金黄色葡萄球菌食品分离株对青霉素G的耐药率最高,达到74.8％;其次为红霉素,为52.6%;此外,对环丙沙星、克林霉素、四环素、土霉素等抗生素的耐药率均超过20%;所有菌株对利福平、亚胺培南、万古霉素等均敏感;检出MRSA共10株,检出率为7.4%。　　二、位于细菌染色体或可移动元件上的耐药基因是细菌产生耐药性的主要原因。本研究采用PCR技术检测14种耐药基因的分布情况。结果显示,携带率最高的是 gyrA、grlA、norA,其携带率分别为93.3%,93.3%和87.4%;其次为blaTEM,携带率为78.5%;oxa、mecA等耐药基因的携带率均低于10%。其中blaTEM、tetM、oxa、mecA、vanA共5种耐药基因的携带情况能够指示细菌在表型上是否耐药。　　三、为了探究菌株之间的相关性,采用三种分型方法进行多态性研究。结果显示,在耐药谱分型中,将所有菌株分为62个耐药谱型,最主要的耐药谱型表现为对青霉素 G、红霉素、环丙沙星、克林霉素四种抗生素同时耐药,这样的多重耐药(MDR)菌株有63株,占46.7%。该方法主要强调了菌株之间的表型差异,分型效果并不理想;在Ward最小方差法聚类分析中,将所有菌株分为26个类群,此种分型方法可以更好地分析连续型变量,具备较好的分型效果;在spa基因分型中,将所有菌株分为33个spa型,其中最主要的spa型是t189和t091,共发现5个新的spa型。　　四、为了进一步探究喹诺酮类抗生素耐药性的形成与耐药基因突变的相关性,采用E-test法测定环丙沙星的最低抑菌浓度(MIC);PCR扩增gyrA和grlA基因,产物测序后进行同源比对。结果显示,135株金黄色葡萄球菌食品分离株对环丙沙星的耐药率为32.6%,grlA和gyrA基因的携带率均为93.3%,突变率分别为37.3%和54.0%,如果只有 grlA发生突变则只会导致菌株低水平耐药性的形成,如果 gyrA和grlA同时发生突变将会导致金黄色葡萄球菌的高水平耐药。　　以上研究结果在一定程度上反映了上海市食源性金黄色葡萄球菌的耐药情况,为探究饲料添加抗生素与耐药程度的正相关趋势、指导临床上抗生素的合理规范使用提供一定的指导意义。通过耐药基因携带率的调查可以从分子水平上探究细菌的耐药机理,为有效发现潜在耐药菌株、进一步探索细菌耐药性的产生机理奠定一定的研究基础。