猪瘟(Classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起的一种猪的高度接触性、致死性传染病，OIE将其列入OIE疾病名录。　　人5型复制缺陷型腺病毒是近年来应用最广泛的基因工程疫苗载体之一。由于缺失了病毒非必需基因区(E1/E3)，使其能够携带大片段的外源基因，而且只能在特定的细胞系中增殖，安全性得到保证。　　RNA复制子是将RNA病毒基因组中的结构基因删除，保留非结构基因和基因组的5’-UTR和3’-UTR的顺式作用元件，转染细胞后能自我复制并高水平表达外源基因。日本脑炎病毒(JEV)与西尼罗河病毒、昆津病毒、黄热病毒、登革热病毒一样，属于黄病毒科黄病毒属成员。它们的实际应用往往受限于其感染性克隆在大肠杆菌中传代的不稳定性。在黄病毒感染性克隆特定部位引入内含子也许能够克服这个困难。　　本研究的目的是利用人复制缺陷型腺病毒(AdV)构建能够递送携带猪瘟病毒免疫原基因的JEV复制子载体。首先将含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的JEV复制子插入到经过改造后带有SwaI位点的pShuttle-CMV载体中，再将来自pCI载体的嵌合内含子插入JEV复制子中，得到转移载体pSh-JEV-In-EGFP，经过转化BJ5183感受态细胞，以及转染HEK293细胞，最终获得能够表达EGFP的JEV复制子重组腺病毒rAdV-JEV-In-EGFP。结果表明，pSh-JEV-In-EGFP载体质粒可以在细菌中传20代仍然保持稳定，而EGFP蛋白可以在rAdV-JEV-In-EGFP感染的HEK293细胞中稳定、高效地表达。进一步用猪瘟病毒E2基因替换EGFP获得重组腺病毒rAdV-JEV-In-E2，免疫荧光试验和家兔免疫攻毒试验显示猪瘟病毒E2基因在rAdV-JEV-In-E2感染后的HEK293细胞中能够正确表达用该载体疫苗候选株免疫家兔后2w开始产生针对CSFV的特异性中和抗体。免疫后7w，用CSFV C株对所有试验兔进行攻毒，发现rAdV-JEV-In-E2免疫组能对家兔提供完全的免疫保护，说明嵌合重组腺病毒猪瘟疫苗具有良好的免疫原性。该腺病毒/JEV复制子嵌合载体疫苗技术平台可用于开发基于JEV复制子的新型嵌合载体疫苗。