鲎试剂作为中国鲎资源的重要应用,在保护公众健康方面发挥了重要作用。当前,全球中国鲎资源正逐渐衰竭,在替代鲎试剂检测的方法或产品还未广泛应用之前,中国鲎仍然是鲎试剂生产的重要原材料;未来的人工养殖可能是中国鲎资源可持续利用及保护的前景或方向之一。本研究主要探讨基于人工养殖条件下的一种快速、便捷和高效的中国鲎血液质量监测方法,进而探究不同采血量、不同采血间隔时间水平对中国鲎血液质量的影响,并检测和筛选持续采血后的显著差异代谢物,旨在为鲎种群资源的保护及鲎试剂的可持续生产提供基础理论数据。主要研究结果如下:1.为了建立一种简便、高效的基于连续采血的中国鲎血液质量监测方法,本研究以北部湾地区中国鲎为实验对象,探究在为期4周的养殖实验后血液Cu含量、血细胞数目、血浆蛋白含量及血淋巴蛋白含量的变化及它们之间的相关性情况。实验结果显示,中国鲎血液中Cu含量为0.94-18.00 mg/L,平均8.33±5.82 mg/L;血细胞数为2.80-22.00×10~3个/m L,平均13.31±5.46×10~3个/m L;血浆蛋白含量为2.26-15.42 mg/m L,平均8.54±4.54 mg/m L;血淋巴蛋白含量为2.54-12.99 mg/m L,平均7.07±3.70mg/m L。实验结束时中国鲎血液中铜元素含量、血细胞数、血浆蛋白含量以及血淋巴蛋白含量等四种血液质量指标在0.001层上相互间均呈极显著相关,血液铜含量与其他3个指标的相关系数分别为0.9166,0.9945和0.9827。以上结果表明,由于鲎血液中铜含量与血细胞数、血浆蛋白含量、血淋巴蛋白含量等指标均呈现极显著相关性,因此,可间接反映其他三个活性指标的含量。2.为了研究不同采血量水平对中国鲎血液质量的影响,进行了为期90天的养殖采血实验,在间隔一个月下探究20、30、40、50和60 m L/kg的采血量水平对实验中国鲎血液铜含量的影响。实验结果显示,雄性幼鲎在0-90天的实验周期中,除了30 m L/kg采血量实验组外,其余组血液Cu含量均出现显著性变化趋势（P＜0.05）,而30 m L/kg实验组在各个采血时间内无显著性差异。除50 m L/kg采血量实验组外,其余采血量实验组血液Cu含量在前60天的实验周期内逐渐降低,而后开始出现上升趋势,其中以20 m L/kg采血量实验组恢复的更为显著。雌性幼鲎在整个实验周期里,所有采血量实验组血液Cu含量均出现显著性变化趋势。与雄性相似,20m L/kg和30 m L/kg采血量实验组血液Cu含量均在第60天下降值最低,而后开始出现恢复趋势;其中同样以20 m L/kg采血量实验组恢复更为显著;但其余实验组仍然是下降趋势。雄性成鲎中在0-90天的实验周期里,40m L/kg采血量实验组的血液Cu含量在各个采血时间里均无显著性差异（P＞0.05）;50 m L/kg采血量实验组在血液Cu含量在第60天开始出现显著性差异（P＜0.05）,而60 m L/kg采血量实验组的血液Cu含量从第0至第30天有显著性变化。雌性成鲎中,在整个实验周期里,所有采血量水平实验组血液Cu含量均出现显著性变化趋势（P＜0.05）。40、50和60 m L/kg采血量实验组血液Cu含量均在第0和第30天有显著性变化,到第90天时,实验成鲎血液Cu含量显著低于第60天（P＜0.05）。以上结果表明,中国鲎在采血后其相应的血液质量会出现显著性变化;较低的采血量水平更有利于鲎的恢复,雄性成鲎以40 m L/kg采血水平血淋巴质量较为稳定,此外,应避免选择繁殖期内的雌性鲎进行采血。3.为了研究不同采血时间间隔对中国鲎血液质量的影响,进行了为期90天的养殖采血实验,在40 m L/kg采血量水平下探究间隔1、1.5、2和2.5个月的时间水平对实验中国鲎血液铜含量的影响。实验结果显示,在整个时间间隔采血的实验周期内,雄性和雌性中国鲎血液铜含量均出现了显著性变化;除了间隔1个月采血实验组外,雄性和雌性间隔1.5个月采血实验组在第二次和第三次采血中血液铜含量出现显著性差异（P＜0.05）;雄性间隔2个月与间隔2.5个月采血实验组血液铜含量在第一次和第二次采血中有显著性差异（P＜0.05）,而雌性间隔2.5个月实验组在第一次和第二次采血中则无显著性变化（P＞0.05）。在相同采血次数下不同采血时间间隔下的铜含量差异统计上均无显著性差异（P＞0.05）。以上结果表明,中国鲎在间隔不同时间多次进行采血后,其血液铜含量均出现显著性变化;在采血相同时间间隔上雌性和雄鲎表现出部分差异性;总体上相同采血次数下不同时间间隔的采血水平无显著差异,但短时间内多次采血后的中国鲎血淋巴质量明显降低且仍有降低趋势,达到正常阈值需要的更长恢复时间。4.为了探究中国鲎连续采血下的差异代谢物的变化,基于非靶向代谢组学,采用超高效液相色谱-串联飞行时间质谱联用仪（UHPLC-Q-TOF MS）检测连续采血（1个月）实验下中国鲎血浆样本中的代谢物,以主成分分析、多元统计分析等方法对相关数据进行统计。实验结果显示,实验中国鲎血液样品在质谱正负离子模式合并后鉴定到749种代谢物,共筛选出19种差异代谢产物,这些差异代谢物主要是5种有机酸、5种苯环型化合物、3种脂质和类脂分子、3种有机杂环化合物、2种有机氮化合物、1核苷酸和类似物;代谢物差异的代谢途径一共有9条,包括氨基苯甲酸酯的降解、脂肪酸生物合成、不饱和脂肪酸的生物合成、鞘脂代谢、组氨酸代谢、氨基酸的生物合成以及次生代谢物的生物合成等,其中P＜0.05的代谢途径仅1条,为鞘脂代谢。以上结果表明,连续采血条件下,中国鲎血液中代谢产物及相关通路发生显著性变化,提示未来人工养殖中国鲎过程中的营养补充将有助于持续采血后血液质量恢复。