鹦鹉热衣原体病诊断方法的建立及应用

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鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)属于衣原体科,嗜性衣原体属,是一种专性细胞内微生物,感染包括人类在内的多种动物。已知的宿主范围包括15种哺乳动物和190种鸟类,其中鸟类中有57种属鹦鹉科。对于规模化的珍禽场,鹦鹉种类、数量多,其他动物品种多,鹦鹉类鹦鹉热衣原体病的诊断与防控成为一个难题。本研究针对某珍禽场鹦鹉病例进行分析诊断,建立了鹦鹉热衣原体病的PCR诊断方法并将该方法应用于种群的疾病防治中,主要内容如下:1.鹦鹉热衣原体病的临床诊断对死亡的折衷鹦鹉,经解剖,部分剖检结果显示:心脏充血,心包积液,心脏外膜有米黄色炎性渗出物;肝脏肿大,钝圆,出血;肺脏出血严重,各支气管充满血液;脾脏坏死,肿胀,出血。对组织进行细胞学检查,肝脏、脾脏、气囊触片,经diff-quick染色见巨噬细胞胞浆有大量嗜碱性颗粒。在肝脏及脾脏中见紫红色的均匀颗粒——衣原体包涵体。病理学检查,见肝脏组织中坏死区域主要为中性粒细胞浸润,并有如罂粟种子大小紫蓝色均匀的颗粒——原体。初诊为鹦鹉热衣原体感染。2.鹦鹉热衣原体病PCR诊断方法的建立研究参照NCBI上公布的鸟源主要外膜蛋白MOMP基因序列设计引物,对以上死亡病例进行采样检测,结果显示疑似的两例为阳性,其他均为阴性。这与临床诊断结果相一致,经反应条件优化,将PCR反应条件的退火温度及退火时间做梯度试验,退火温度在54℃及55℃条带明显,退火时间在45 s条带比在30 s的明显,初步确定了PCR检测体系的退火温度为54℃,脱火时间为45 s。初步建立了鹦鹉类鹦鹉热衣原体的PCR检测方法。通过实验动物回归试验,对死亡的胚体进行PCR检测,经测序结果显示,该胚体受鹦鹉热衣原体感染。表明以上死亡病例为鹦鹉热衣原体感染。3.鹦鹉热衣原体病PCR诊断方法的应用利用德国Biogal公司生产的鹦鹉热衣原体抗体检测试剂盒对所有鹦鹉进行检测,将阳性鸟和阴性鸟分开饲养在两片区域,分为红区和绿区,并在两区域中分别选取5个品种,每个品种各4对种鸟,分别为红绿金刚鹦鹉、琉璃金刚鹦鹉、五彩金刚鹦鹉、折衷鹦鹉、橙翅亚马逊鹦鹉共80只,进行试验数据统计,对试验的80只种鸟发病情况进行分析并对其近两年的后代发病情况进行分析。同时对两区试验鹦鹉用PCR检测技术进行筛查,结果显示红区鸟发病率高于绿区,红区鸟后代的鹦鹉热衣原体抗体阳性率高于绿区鸟后代的鹦鹉热衣原体抗体,红区鸟后代发病率高于绿区鸟的后代。对发病鹦鹉应用多西环素或土霉素进行治疗,经不同给药方式对比,结果显示:饮水给药死亡率为20%,治愈率40%;口服给药死亡率10%,治愈率60%;肌注给药死亡率20%,治愈率20%。通过用药血液白细胞总数下降显著。表明多西环素或土霉素口服给药较饮水给药效果好,肌注给药死亡率高。以上结果表明:对感染鹦鹉热衣原体的动物及早诊断,用适当的药物及早治疗,对动物分群饲养,是有效的防控方案。这些方法为鹦鹉类感染鹦鹉热衣原体临床诊断工作提供依据,利于规模化养殖中疾病防控及净化鹦鹉繁殖种群。
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