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研究背景和目的肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma/HCC)是全球第六位最常见的癌症。近几年医学理念、诊疗技术不断创新,手术切除治疗、局部消融、肝血管栓塞、放疗、局部化疗、靶向治疗等治疗方式都有一定的进展,呈现出以手术为主的综合治疗方案。迄今为止,虽然以MELK为主要靶标抑制剂尚未得到FDA批准应用,但近几年来各种MELK抑制剂已积极投入研究,或许由于尚未完全揭示MELK在肿瘤形成中的功能和作用机制,以及可能存在多种遗传变异因素、环境因素等参与肿瘤的发生发展,以致MELK抑制剂尚未能有效应用于各期临床试验。因此,全面了解MELK与恶性肿瘤相关的致癌性激酶的功能特征,可以促进小分子激酶抑制剂靶向治疗恶性肿瘤的研究,这将是未来几年的研究方向。研究内容和方法1、Oncomine和Kaplan-Meier plotter数据库对肝细胞肝癌MELK基因的信息进行深入挖掘2、MELK在不同肿瘤中的表达情况3、不同肿瘤MELK共表达基因mRNA表达与检测4、MELK干扰效率验证5、MELK SiRNA干扰对细胞增殖能力的影响6、OTPSSP167抑制剂对肝癌细胞增殖、抑制、存活能力和IC50值的影响7、OTPSSP167抑制剂和SiRNA干扰对肿瘤细胞侵袭能力的影响8、OTSSP167抑制剂和SiRNA干扰对肿瘤细胞克隆增殖能力的影响9、OTSSP167抑制剂和SiRNA干扰对肝癌Hep-3B凋亡能力的影响研究结果1、MELK基因在多种肿瘤中高表达,包括肝细胞肝癌、乳腺癌、结直肠癌等;基因表达与患者生存状态具有相关性;MELK共表达的基因包括:TOP2A、RACGAP1、GINS1、NDC80等2、MELK在肝癌细胞中Hep-3BMELK mRNA的表达相对于PANC-1细胞株、HGC27、Hep-G2细胞株较高3、HEP-3B、MCG-27和PANC-1细胞株MELK共表达基因GINS1、NDC80、RACGAP14、经SiRNA干扰后,MELK SiRNA1组、MELK SiRNA2、MELK SiRNA3、MELK mRNA的表达下降5、SiRNA1组、SiRNA2组、SiRNA3组、GAPDH组、Mock Transfection组与对照组相比增殖能力无统计学差异6、随着OTSSP167抑制剂抑制剂浓度的增加,细胞株的增殖能力、存活能力逐渐下降,对细胞株的抑制率逐渐提高。肝癌Hep-3B和Hep-G2细胞株IC50值分别是222nM、101.3nM,95%可信区间分别是:(198-249.8)nM、(74.42-141.1)nM7、OTSSP167抑制剂对Hep-3B和Hep-G2侵袭能力有显著影响,48h和72h细胞侵袭能力与对照组相比均下降(P<0.001)。SiRNA干扰对肝癌Hep-3B和Hep-G2侵袭能力无影响,48小时和72小时细胞侵袭能力与对照组比无明显改变(P>0.05)8、MELK的表达被干扰后,肝癌细胞体外克隆增能力未见明显降低(P>0.05),而OTSSP167抑制剂组则显著抑制肝癌细胞的体外克隆形成(P<0.001)9、与对照组相比,SiRNA干扰组未见早期凋亡细胞;OTSSP167组随着抑制剂浓度的增加,早期凋亡细胞数量明显增加。研究结论(1)MELK基因在肝癌Hep-G2和Hep-3B细胞中的高表达情况,与肿瘤细胞凋亡、增殖与迁移等生物学功能有关(2)SiRNA干扰MELK基因表达,Hep-G2和Hep-3B细胞生物学功能未受到抑制(3)OTSSP167抑制剂可以抑制肝癌Hep-3B和Hep-G2克隆增殖和侵袭能力,并使肿瘤细胞抗凋亡能力下降,且随着抑制剂浓度的增加,对肿瘤细胞生物学功能的抑制能力加强。