奈达铂联合放射治疗对人鼻咽癌5-8F细胞作用的实验研究

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目的:通过体外实验研究奈达铂单独或联合X-射线对人鼻咽癌5-8F细胞的细胞增殖动力学影响以及作用机制,初步探讨奈达铂作为放射增敏药物的可能性,为临床上鼻咽癌放射增敏治疗提供实验基础。方法:本实验应用MTT法检测奈达铂对人鼻咽癌5-8F细胞的细胞增殖动力学影响,并求得IC10为后续试验提供适合药物浓度;利用细胞克隆形成实验首先得到低剂量奈达铂对人鼻咽癌5-8F细胞的最佳照射时间(T),进而根据合适药物浓度和最佳照射时间再次进行细胞克隆形成实验,并根据实验数据绘制细胞生存曲线,求得放射敏感性相关参数,观察奈达铂的放射敏感性;应用流式细胞术观察低剂量奈达铂单独或联合X-射线对人鼻咽癌5-8F细胞周期及细胞凋亡的影响,运用免疫细胞化学法检测低剂量奈达铂单独或联合X-射线对人鼻咽癌5-8F细胞凋亡蛋白Fas表达的影响,以探讨其作用机制。结果:1.MTT法结果显示:分别用不同浓度奈达铂(1、2、4、8、16、32μg/ml)作用人鼻咽癌5-8F细胞24h后,细胞增殖被不同程度的抑制,增值抑制率分别为11.40%、30.63%、38.01%、65.68%、73.43%、81.92%,随药物浓度增加及药物作用时间延长,奈达铂对人鼻咽癌5-8F细胞增殖抑制作用增强。根据细胞增殖抑制率,应用SPSS17.0软件求得奈达铂对人鼻咽癌5-8F细胞的IC50为5.640μg/ml,IC10为1.128μg/ml。2.细胞克隆形成实验结果显示:最佳照射时间T为24小时,根据实验数据应用Sigmaplot12.0软件绘制细胞生存曲线,求得放射敏感性相关参数(Do、Dq、N):单纯放疗组的参数分别为:1.453Gy、1.216Gy、2.289;1μg/ml奈达铂+放疗组分别为:DO值为0.947Gy、Dq值为0.701Gy、N值为2.087,根据公式计算放射增敏比(SER),1μg/ml奈达铂+放疗组放射增敏比(SER)SERD0、SERDq、SERSF2分别为1.537、1.690、2.068。3.流式细胞术检测结果显示:(1)X-射线(OGy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)单纯或联合奈达铂作用鼻咽癌5-8F细胞后,其细胞凋亡情况改变应用SPSS17.0进行统计分析,奈达铂+放疗组细胞凋亡率较单纯放疗组显著升高(P<0.05),。(2)X-射线(OGy、2Gy、4Gy、6Gy)单纯或联合奈达铂作用鼻咽癌5-8F细胞后,其细胞周期G2/M期分布改变应用SPSS17.0进行统计分析,奈达铂+放疗组细胞凋亡率较单纯放疗组显著升高(P<0.05)。4.细胞免疫化学染色结果显示:X-射线(OGy、2Gy、4Gy、6Gy)单纯或联合奈达铂作用鼻咽癌5-8F细胞后,其细胞Fas蛋白表达情况应用SPSS17.0进行统计分析,奈达铂+放疗组细胞Fas蛋白阳性表达率较单纯放疗组显著上调(P<0.05)。结论:1.低剂量奈达铂可提高人鼻咽癌5-8F细胞的放射敏感性,其机制可能与低剂量奈达铂可上调细胞内的Fas蛋白表达,从而诱导人鼻咽癌5-8F细胞的凋亡,改变细胞周期分布有关;2.临床治疗中,奈达铂有可能会成为治疗鼻咽癌的放射增敏剂。
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