基于贵金属高灵敏探针的设计、构建及其在免疫分析中的应用

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酶联免疫吸附和免疫组化是生物分析和临床诊断中经典的检测手段,但是这两种方法由于灵敏度较低,并不能满足发病初期对病原标志物的诊断。本论文主要是针对这两种免疫分析方法进行信号放大系统构建,提高检测灵敏度:1)基于重复单元信号放大体系制备AuNP-PAMAM聚集体用于绒毛膜促性腺激素(hCG);2)基于纳米酶与生物酶双催化作用提升免疫分析中的信号,并采用hCG进行了响应信号的研究;3)构建高催化活性的Pd-Ru-Ir三元金属纳米酶体系,并应用于免疫组化研究中,响应信号提升8.7倍。1、采用生物素和巯基化的PAMAM聚合物诱导纳米金聚集,并且与抗体偶联,形成一种类项链状的聚集体AuNP-PAMAM探针,该聚集体由多个纳米金重复结构单元组成,平均粒径达156 nm。将探针用于hCG的检测,线性区间为0.10-6.40 IU/L,灵敏度高达0.03 IU/L,与传统的BA-ELISA(0.8 IU/L)和经典的纳米金为载体的荧光探针(0.6IU/L)进行比较,AuNP-PAMAM探针灵敏度具有明显优势优势。2、构建了纳米酶和HRP双催化的Au@Pt-HRP探针,将该探针用于检测hCG,灵敏度高达0.10 IU/L,线性区间是0.40-12.80 IU/L,与BA-ELISA相比较而言,优势较明显,灵敏度提升近8倍。对于Au@Pt纳米酶表面结合的HRP进行了计算,结果表明,21-22个HRP分子能结合在Au@Pt纳米酶表面,超出传统的信号放大载体纳米金能结合的HRP分子数(11-12)。3、对于中空(Ag-Pt,Ag-Pd)和多孔状(Pd-Pt)等三种纳米酶的催化活性进行了研究:多孔Pd-Pt纳米酶在TMB-H2O2的催化体系中活性最强。基于双催化探针的观念,合成了Pd-Pt-HRP探针,用于检测hCG,灵敏度高达0.07 IU/L。并通过XPS和TEM表征及氮吸附脱附实验等手段证明HRP分子能够进入Pd-Pt表面的孔道中。进一步的对该纳米酶表面的HRP分子数量做了计算,约31-32个酶分子能结合上该纳米酶。最后对纳米酶的两种基础晶面进行了合成,Pd-Pt八面体((111)晶面)纳米酶在催化作用中占据优势。4、对铂系金属中的四种贵金属(Rh、Ru、Pt和Ir)的催化性能做了比较,Ir更适合TMB-H2O2体系。并在此基础上,合成了三元金属Pd-M-Ir(M=Rh、Ru和Au),对于Ir元素而言,在TMB-H2O2的催化体系中,催化活性随着d-band中心的下降而上升,将活性最高的Pd-Ru-Ir纳米酶应用于免疫组化中,所得到的光密度平均值高于商业化免疫组化信号8.7倍。
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