转猪CD151基因PK-15细胞系建立及其对PRRSV易感性研究

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猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)主要感染猪巨噬细胞,导致严重的免疫抑制。在细胞培养中,PRRSV能感染原代猪肺巨噬细胞和MARC-145等非洲绿猴肾细胞系。CD151是PRRSV3’UTR RNA结合蛋白,猴源CD151在PRRSV感染MARC-145细胞中发挥重要作用,但猪CD151在PRRSV感染猪源细胞中的作用尚无研究报道。本研究根据发表的序列设计引物,通过RT-PCR从猪肺泡巨噬细胞中扩增CD151编码序列,序列测定结果显示扩增产物与发表的猪CD151核苷酸序列同源性为99.7%。将猪CD151编码序列克隆至真核表达载体pCDNA3.0,将重组质粒pCDNA3.0-CD151转染PK-15细胞,用G418抗性筛选获得CD151+PK-15细胞克隆,RT-PCR检测结果显示能检测到预期的762bp条带。用VR-2332株PRRSV分别感染MARC-145细胞、CD151-K-15细胞和CD151+PK-15细胞,定期观察病变,结果显示MARC145出现明显的细胞病变,而CD15-PK-15细胞和CD151+PK-15细胞无细胞病变,但CD151+PK15细胞为PRRSV抗体间接免疫荧光试验检测阳性,RT-PCR检测ORF5基因阳性。这些研究结果表明:猪CD151基因转染能使PRRSV非易感细胞PK-15获得易感性。
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