论文部分内容阅读
鱼类代谢性肝脏疾病是涉及到一系列代谢机能紊乱的复杂动态发展过程,但目前缺乏对鱼类代谢性肝脏疾病表观响应及代谢调控机理的系统性研究。本文以大口黑鲈为研究对象,探究导致代谢性肝脏疾病发生的主要原因及可能的调控机制,为配合饲料在大口黑鲈产业中的合理利用提供参考。试验1:高糖配合饲料引发大口黑鲈代谢性肝病的表型、代谢特征及MAPK调控功能分析通过与投喂冰鲜鱼(chilled fish,CF)比较,探究高糖配合饲料(artificial diet,AD)引发大口黑鲈代谢性肝病的主要表型、代谢特征及MAPK的调控功能。结果表明:与CF组相比,AD组大口黑鲈的FBW降低,VSI、HSI及HL显著升高。CF组肝脏正常,而AD组肝脏细胞空泡化、纤维化严重,且糖原蓄积明显。此外,AD组大口黑鲈肝脏中炎症反应、细胞凋亡水平显著升高。AD引发的肝脏损伤与糖脂代谢障碍和胆汁淤积有关。MAPK参与调控大口黑鲈代谢性肝病,其中ERK1/2、JNK1/2被显著激活,而p38α磷酸化被显著抑制。试验2:高糖饲料中添加胆汁酸对大口黑鲈生长、代谢性肝病的影响及MAPK调控功能研究通过在基础饲料中(碳水化合物25.6%,淀粉18.7%)分别添加0(B0)、300(最高推荐添加剂量,ADI=5.20mg/kg w/d,B300)、1500mg/kg(治疗剂量,ADI=25.8mg/kg w/d,B1500)胆汁酸,探究胆汁酸干预对高糖引起的代谢性肝病的影响及MAPK的调控功能。结果表明:添加300、1500mg/kg胆汁酸,显著提高大口黑鲈的生长性能。添加300mg/kg胆汁酸改善糖脂代谢,并显著缓解肝纤维化,但是肝脏中的炎症和凋亡反应显著增强。添加1500mg/kg胆汁酸,显著降低HSI、HL及肝脏中的炎症和凋亡水平,基本治愈高糖引起的代谢性肝病。1500mg/kg胆汁酸对JNK的蛋白表达水平无显著影响,但是显著激活肝脏中ERK1/2、p38α,提示ERK1/2激活可能参与胆汁酸介导的代谢性肝病的修复,而p38α磷酸化激活是高糖饲料诱导大口黑鲈代谢性肝病修复的关键控制点。试验3:p38α/NFκB/TNFα信号通路参与调控大口黑鲈代谢性肝病通过对肝脏中p65NFκB蛋白表达水平及p38α/p65NFκB共定位分析,探究p38α磷酸化对其下游炎症、凋亡通路的调控作用,并在大口黑鲈原代肝细胞中进行验证。结果表明,AD组大口黑鲈肝脏中p65NFκB被显著激活,而添加胆汁酸后,显著抑制p65NFκB的磷酸化,提示p65NFκB参与调控代谢性肝病。此外,P-p38α与p65NFκB的蛋白完全异位表达,且p38α磷酸化激活显著抑制p65NFκB的表达,表明p38α可能通过调控p65NFκB参与代谢性肝病的发生发展。在大口黑鲈原代肝细胞中的研究发现,抑制p38α磷酸化后,p65NFκB被显著激活入核,且蛋白表达量升高,同时,激活态TNFα的表达量显著上升,证实p38α-p65NFκB-TNFα是调控大口黑鲈代谢性肝病发生发展的重要信号通路之一。