自组装环荧光显微成像技术在牛奶及生化样品中抗生素含量检测的应用

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本文基于不同类抗生素药物的检测方法,简要介绍了自组装环的形成机理特点以及自组装环荧光显微成像技术在药物分析中的特点,并以此技术为基础,建立了美他环素、米诺环素、依诺沙星、环丙沙星和磺胺嘧啶的分析方法,并应用于测定牛奶、药片、注射液、尿液、兔子血清及合成样等样品中不同种类抗生素药物的含量。美他环素在pH为10.6的NH3-NH4C1缓冲溶液及PVA-124存在下,可形成直径1.84mm、环线宽59.6μm的自组装环。当点样体积为0.3μL时,线性范围为3.39×10-13-2.03×10-12mol·ring-1 (1.13×10-6-6.77×10-6mol·L-1),检出限(3σ)为1.05×10-13mol·ring-1(3.5×10-7mol·L-1)。实测盐酸美他环素片中美他环素含量及四种牛奶中残留美他环素的含量,回收率分别在95.2%-106.2%和94.7%-104.0%。在pH 9.99NH3-NH4Cl缓冲溶液及PVA-124存在下,Mg2+和美他环素形成1:1配合物,并在憎水性玻片表面形成一个自组装环,环直径0.93mm,环线宽26.2μm。当点样体积为0.30μL时,线性范围为1.30×10-13-2.10×-12mol·ring-1 (4.40×10-7-7.20×10-6mol·L-1),检出限为1.70×10-14mol·ring-1(5.67×10-8mol·L-1)。应用于生鲜牛奶样品中抗生素的检测,回收率为93.8%-107.8%,RSD小于4.3%。在pH8.50NH3-NH4Cl缓冲溶液和PVA-124存在下,将Ca2+离子增敏的米诺环素液滴滴在疏水性载玻片表面上,微波加热,溶剂受热挥发后,形成直径约为1.7mm,环带宽约为45.3μm的自组装环。当点样体积为0.3μL时,线性范围为1.9×10-6-6.0×10-5mol·L-1,方法的检出限为1.9×10-7mol·L-1。应用于米诺环素胶囊中米诺环素和牛奶中残留米诺环素的检测,回收率分别为104.3%-105.0%和96.0%-105.9%,相对标准偏差小于3.47%。在pH9.70NH3-NH4Cl缓冲介质和PVA-124存在下,Al3+-依诺沙星液滴在疏水性玻璃表面上受热挥发形成直径约为1.63mm,环线宽约为50μm的自组装环。当点样体积为0.20μL,线性范围1.00×10-13-5.00×10-13mol·ring-1 (5.00×10-7-2.50×10-6mol·L-1),检出限为7.65×10-15mol·ring-1 (3.83×10-8mol·L-1)。应用于葡萄糖酸依诺沙星注射液中依诺沙星含量和牛奶中残留依诺沙星含量的检测,回收率分别为96.9%-107.0%和94.2%-102.5%,相对标准偏差(RSD)分别小于4.1%和2.4%,实测了健康志愿者服用依诺沙星胶囊后尿液中依诺沙星的平均浓度及兔子灌喂依诺沙星后血清中药物平均浓度,均得到了较满意的结果。金属离子在胶束体系溶液中形成荧光配合物的过程中,表面活性剂也可能参与组成更高层次的配合物,从而增大了配合物分子的有效吸光截面积,增大了分子的摩尔吸光系数,导致荧光强度的增大。溶剂在微波受热蒸发后,含有环丙沙星-Al3+-CTMAB的液滴可以在固载表面形成直径约2.76mm、环宽43.5μm的自组装环。当点样体积为0.2μL时,线性范围为1.0×10-13-6.0×10-13mol·ring-(5.0×10-7-3.0×10-6mol·L-1),检出限为1.0×10-14mol·ring-1(5.0×10-8mol·L-1)。应用于牛奶中环丙沙星残留量的测定,回收率为92.9%-100.8%,RSD小于3.0%;应用于药片、注射液中环丙沙星含量的测定,测定值与厂家提供的标示值接近,RSD小于2.5%;应用于兔子服用环丙沙星药片后血清中环丙沙星浓度的测定,得到了相应的药代动力学参数。由此在pH3.12 HAc-NaAc缓冲溶液、PVA-124存在的条件下,建立了荧光胺衍生磺胺嘧啶荧光体系。溶剂在微波受热蒸发后,含有磺胺嘧啶衍生物的液滴可以在固载表面形成直径约1.86mm、环宽54.9μm的自组装环。当点样体积为0.2μL时,线性范围为7.8×10-14-1.8×10-12mol·ring-1 (3.9×10-7-9.0×10-6mol·L-1),检出限为7.8×10-15mol·ring-1 (3.9×10-8 mol·L-1)。应用于牛奶、合成样、药片中磺胺嘧啶的测定,回收率在91.0%-105.8%,RSD小于4.4%。通过以上不同体系的自组装环荧光显微成像技术用于抗生素药物测定的研究,表明该技术具有良好的可靠性及实用性,为牛奶等食品中残留抗生素的检测以及生化样品分析提供了一种新方法,且具有背景干扰小、耗样量少、简单、快速及对环境无污染等优点。
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