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艾滋病发病机制、临床表现和相关传播途径的研究显示，不仅病毒学的因素、个体的免疫反应参与了其中的过程，而且宿主的遗传因素也作为其中的主要因素之一参与了HIV-1感染和发病过程。 HIV-1进入CD4+细胞是由病毒衣壳糖蛋白、CD4受体和协同受体(又称趋化因子受体)相互作用完成的。初始感染的HIV-1病毒株(例如R5株)结合的协同受体是趋化因子受体-5(CC chemokine receptor 5，CCR5)，而在感染后期的HIV-1 X4毒株，则使用趋化因子受体CXCR4。CCR5的配体RANTES、MIP-1 α、MIP-1β和CXCR4的配体SDF1都是HIV-1进入细胞和复制的有效抑制剂。HIV-1协同受体和它们的天然配体基因的变异已经证明能改变HIV-1的感染和发病进程。 已经发现的3个主要RANTES基因单核苷酸多态性(SNP)位点是位于基因启动子区的-403G／A、-28C／G变异和位于第一个内含子区的 第四军医大学得士学位论文翔.目...口.口口砚目曰.口.Inl .IT/C变异。有报告认为一28G突变能够上调RANTES的转录，而另一个研究则报告一03A上调RAN丁ES的转录。在日本人HIV一，感染者中4031一28AG单倍型与较低的CO4+T细胞的损耗有关;对欧裔美国人的研究中，复合基因表型GCIAC对HIV一1易感，而相对于GC/GC则能够限制AIOS发病进程。而另外一个研究则认为GCIAC对于HIV-，感染和AIOS进程均易感。尺AN下ES基因Inl .ITIC变异，.nl.IC单倍型下调RANTES基因的转录，具有!nl .IC等位基因和HIV一1感染者快速发展为AIDS密切相关。 考虑到RANTES基因多态性之间的可能的相互影响和相互作用，来自于不同民族和不同研究者的结果存在较大的差别，为此，我们首次研究了RAN丁ES的这3个SNPs位点等位基因在我国汉族人群中的分布，以及它们与HIV-，感染和AIOS发病相关指标的关系，以期评价RANTES基因多态性对HIVIA旧S流行和发病的意义，为我国艾滋病防治提供理论依据。材料和方法研究人群 202名汉族健康人标本收集于2000年一2001年302医院门诊的无亲缘关系的健康体检者，HIV抗体阴性。来自于全国19个省市。 287名汉族HIV一，感染者标本，231例通过献血或者静脉吸毒途径感染，来自于河南、河北和新疆;56例通过性接触感染者来自广东。 另外，对一组40名来自于河南同一地区，通过商业献血而感染HIV一， 第四军医大学俘士学位论文...口.口........口.....的汉族人，进行了外周血的病毒载量、CO4+和COS+丁淋巴细胞计数检测，以评价基因多态性对疾病进程的影响。R典NTES基因多态性分型 用PC卿RFL尸方法进行基因分型。RAN丁ES基因的一4O3nt和一28nt区域的扩增采用nested一PCR。外侧正向引物为5’一acttttceeaaaggtegett，反向引物为5’一cacgtgctgtcttgatcotc，产物大小为692bp。再以其为模板，分别扩增一403和一28区。403区扩增的正向引物为5’一eaagaaatteecaeaagaggaetea，反向引物5’一agttcetgettatteatoaeagatcgta，用RSAI消化。一28区扩增正向引物5飞ggtaaaaetaaggatgtoageaga，反向引物s’一etcaggotggegctttatagggegaatt，用EeoRI消化。Inl .1的扩增，正向弓}物为5’一cctggtCttgaecaecaea，反向引物为5’一getgaeaggeatg衬teaga，用Mbo11消化。抽取了部分扩增产物进行序列分析。外周血浆中病毒RNA的荧光定量pCR检测 用人类免疫缺陷病毒(HIV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂，A旧IPrism⑧7900型高通量荧光定量PCR仪检测血浆中RNA的拷贝数，检侧报告值下限为500copieslml。外周血CO4+和COS+T淋巴细胞计数采集静脉血，立即分离PBMC，用流式细胞仪测定CD4+和CDS+T淋巴细胞亚群，并根据细胞的绝对计数计算出CO4十IcOS+比值。H即月前病毒ONA的检侧和病毒亚型分析第四军医大学协d卜学位论文 提取外周血细胞ONA，用巢式PCR扩增HIV env基因CZ~V3区，产物直接进行测序，分析亚型。得到的12条序列用Meg软件的N内hbor-joining法绘制系统树，比较毒株之间的进化关系。结果汉族健康人群RANTES基因多态性 鉴定了202份健康汉族人RANTES基因的多态性，具有一403、一28和Inl .1三个SNPs位点、RANTES一03，一28的等位基因分布符合Hardy一Weiberg平衡。 RANTES一03等位基因频率很高，GIG、GIA、周A分别为42.1%、39.，%和18.8%;其中男性分别为44.2%、39.1%和16.7%:女性分别为373%、44.1%和18.6%。按单倍型计算G为62.4%，A为37.6%。 RANTES一28等位基因频率较高，C/C、C/G、G/G分别为84.2%，，4.3%和，.5%。其中男性分别为86.7%、12.6%和0.7%;女性分别为76.3%、20.3%和3.4%。按单倍型计算C为911%，G为8.9%。 启动子区一4031一28复合基因具有6个表型，其构成是，GC/GC占42 .1%、GCIAC 29.2%、ACIAC 12.4%、GCIAG 10.9%、ACIAG 3.5%、AG热G 1.5%。单倍型分别是GC62.7%，AC28.7%，AGS.6%。 RANTES Inl .1等位基因频率为T汀71 .0%、T/C 21 .1%和C/C7.9%，其中男性分别为76.9%、17.4%和5.7%;女性分别为58.2%、29.1%和12.7%。男女之间分布不均衡(尸<0 .