钙网蛋白（Calreticulin，CRT）是位于内质网上的一种钙结合蛋白，具有多种生物学功能并参与了细胞内的多条信号通路。例如胞内钙稳态、细胞粘附、蛋白质折叠等等。最近有大量研究表明CRT在多种恶性肿瘤中扮演了极其重要的角色，例如胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、肺癌、乳腺癌、胃肠道癌和尿路癌等等。上皮-间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition，EMT）是指上皮细胞在特定的生理和病理情况下向间质细胞转化的现象，与肿瘤的原位侵袭和远处转移有着密切的关系。之前有研究表明在CRT过表达的狗肾细胞系中，过表达CRT能够使狗肾细胞形态发生类似于EMT特征的变化。此外，与对照组细胞相比，CRT过表达细胞中EMT的上皮标记物E-cadherin的表达水平也发生了明显的下调。而在胃癌细胞中，过表达的CRT也能够调节EMT标记基因的表达。这些研究都表明，CRT与EMT之间有着密切的关系，CRT可能参与调控EMT的发生。但是CRT是通过什么信号机制来调控EMT，到目前为止研究的还不是很透彻。在本文中，我们使用10ng/mL的TGF-β1来诱导人非小细胞肺癌A549细胞发生EMT，建立了肺癌细胞EMT模型。接下来我们利用CRT过表达重组质粒和siRNA分别过表达或低表达CRT，研究了CRT对肺癌细胞发生EMT以及迁移能力的影响，并进一步研究了CRT调控肺癌细胞发生EMT的相关机制。主要实验结论如下：　　①利用终浓度为10ng/mL的TGF-β1诱导48h，成功建立了肺癌细胞EMT模型，同时，CRT在EMT模型中高表达。　　②过表达CRT不能直接诱导肺癌细胞发生EMT，但却能够促进TGF-β1诱导的EMT。进一步的研究发现，沉默CRT抑制了TGF-β1诱导的EMT。　　③我们利用划痕实验研究了CRT对肺癌细胞迁移能力的影响。实验结果表明，过表达CRT基因，能够增强肺癌细胞的迁移能力；沉默CRT基因，能够抑制肺癌细胞的迁移能力。CRT对肺癌细胞的迁移能力具有正调控作用。　　④在10ng/mL的TGF-β1处理条件下，过表达CRT能够明显上调Smad2和Smad3的磷酸化水平。相反的，沉默CRT非常明显的抑制了TGF-β1诱导的Smad2和Smad3的活化。而Smad信号通路的特异性抑制剂SB-431542削弱了过表达CRT对TGF-β1诱导EMT的促进作用。实验结果证明，CRT可以通过Smad信号通路来调控TGF-β1诱导的EMT。　　⑤ TGF-β1诱导的EMT能够增强Thapsigargin（TG）诱导的内质网钙释放，同时也能增强钙池操纵的钙内流。过表达CRT能够增强TG诱导的内质网钙释放，但是并不能够影响钙池操纵的钙内流。而沉默CRT表达后，能够抑制TG诱导的内质网钙离子释放，抵消了TGF-β1对内质网钙离子释放的增强作用，但是对钙池操纵的钙内流没有影响。　　⑤利用钙离子激动剂 TG和钙离子螯合剂BAPTA-AM改变胞内钙离子浓度能够通过TGF-β1下游Smad信号通路来调控TGF-β1诱导的EMT。　　综上所述，CRT能够通过 Smad信号通路来调控TGF-β1诱导的EMT。而TGF-β1诱导的EMT与胞内钙离子信号密切相关，CRT也部分参与了胞内钙离子信号的调控。研究结果证实，CRT能够成为一个新的干预EMT发生的靶点，可以为治疗肺癌的转移提供新的理论基础和治疗方法。