第一部分实验室检验指标用于协助决策早产NEC患儿手术的价值背景NEC(necrotizing enterocolitis,坏死性小肠结肠炎)是早产儿急性肠道炎症性疾病,病死率高,预后相对较差。临床可表现为胃潴留、腹胀、便血等肠道症状,又可表现为呼吸暂停、反应低下、休克等全身中毒症状。目前临床医生对此疾病的治疗原则和方法已相对统一,包括绝对禁食、持续胃肠减压、抗生素的应用等内科保守治疗方法和坏死肠管切除等外科手术治疗。ⅡB期至ⅢA期之间的NEC患儿,疾病发展变化快,表现又无明显特殊性。此时手术的相对适应症难以把握,这时应用内科保守治疗能否控制病情的发展,还是需积极手术去除肠道病灶,是否有临床特异性的指标来协助治疗,是我们亟需思考的问题。目的本文将讨论早产NEC患儿发病后前三天不同实验室检验指标与NEC手术的相关性,选择可信度更高的指标评估患儿NEC手术的需要,以更好把握临床手术时机。方法本研究收集2014年12月至2015年7月我院极早产NICU科室收住的30例胎龄<33周、Bell分期Ⅱ期以上的NEC患儿的临床资料。根据治疗方案分为手术组16例,未行手术治疗的保守组14例。将早产NEC手术治疗组和保守组发病后连续三天内实验室检验指标,应用SPSS 19.0统计软件进行分析比较。研究因素包括:发病后三天内白细胞计数、粒细胞比值、血小板计数、C反应蛋白数值。结果在研究因素中,早产NEC患儿发病第一天的白细胞计数和CRP值,第二天的血小板计数和CRP值,第三天的血小板计数和CRP值与NEC手术相关。发病后第二天的血小板计数的减低是NEC手术的独立高危因素。针对发病后第二天血小板计数进行ROC曲线分析计算出cut-off值为144.5*109/l,对应的敏感性为81.3%,特异性为87.5%,阳性预测值为89.45%,阴性预测值为91.52%。结论1.早产NEC患儿发病第一天的白细胞计数和CRP值,第二天的血小板计数和CRP值,第三天的血小板计数和CRP值与NEC手术治疗相关。2.发病后24-48小时内血小板计数是NEC手术的独立高危因素。当数值低于144.5*109/l时,提示手术需要性高,我们需要结合患儿临床进程情况,决策更好的治疗方案,把握最佳手术时机。第二部分早产NEC患儿血清定量蛋白组学分析背景NEC可导致肠道急性炎症性病变,其发病原因错综复杂,更容易侵袭肠道发育不成熟、功能低下以及免疫功能弱的早产新生儿。此病无特异性表现及检验标准,进展快,疾病预后差,对新生儿生长发育和生活质量影响极大。现多认为NEC的发病机理为肠上皮屏障功能低下或损伤、肠道血供调节差及饮食的影响,大量条件致病菌滋生或菌群易位等等。从而大量炎症介质产生,引起肠上皮细胞损伤,肠壁坏死穿孔、全身炎症反应综合征甚至休克、多器官衰竭。虽然近年有关NEC的研究热度持续升高,但其相关的分子机制的组学文献亦较少。差异蛋白组学是分析不同时期或不同状态下,动态变化的蛋白质组之间的差异。TMT(Tandem Mass Tags,串联质谱标签)技术是应用同位素标签,特异性标记多肽氨基集团,进行质谱分析,并行计量了多样品中蛋白质的相对含量。目的通过TMT技术研究早产NEC患儿血清定量蛋白组学,利用分子细胞学信息,获取对疾病发生发展机制更深层的认识。方法:收集2014年12月在我院极早产NICU住院治疗双胎1对,其中1例为明确诊断NEC患儿,Bell分期为ⅢA,生后24小时入院,胎龄为30周,NEC发生前喂养量达110ml/kg.d。另1例为与NEC患儿同期住院的双胞胎(没有罹患NEC、病情相对稳定、没有严重感染)。将血样收集,血清去高丰度蛋白,经过样品质量检验、TMT标记全蛋白、C18色谱柱样品分级、质谱相对定量检测和质谱数据分析得出差异蛋白。将所有差异蛋白的基因ID信息导入KOBAS 2.0软件,进行信号通路、疾病和GO富集分析。结果:1.共鉴定和定量了1515种蛋白。选择表达上调2倍和表达下调0.5,且配对t检验p值小于0.05,作为定义差异蛋白的筛选标准,共发现44种差异蛋白,其中表达显著上调的有24种,下调的有20种。2.显著富集的通路包括血小板活化、补体和凝血级联反应、蛋白降解、活性氧类物质解毒、外源性抗原交叉呈递、碳水化合物代谢、细胞调亡的调节。显著富集的信号通路涉及到TGF-β受体信号传导通路、P53信号通路、Hedgehog信号通路等等。结论:1.TMT定量蛋白质组学技术可有效用于筛选NEC患儿差异表达的蛋白质;2.本研究通过对NEC患儿特异血清标记物和发病机制进行初步探索,筛选出可信度高的44种差异蛋白质,显著富集的生物过程包括血小板活化、活性氧类物质解毒、伤口愈合等,多种蛋白也与参与到血小板脱颗粒、血小板活化等生物活性中,结合第一部分内容,揭示了在多种病理因素作用下,血小板相关生物过程与NEC的发生有直接的关系;3.本次研究在蛋白组学的基础筛选出显著富集的信号通路,提示NEC疾病的发生涉及了TGF-β受体信号传导通路、P53信号通路、Hh信号通路等等,它们在病程中介导了上皮间质转化、肠道细胞调亡、肠道组织损伤和修复、维持肠道紧密连接屏障完整性等生物过程。