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第一部分：靶向IGF-1R的siRNA表达载体的构建及其对肺癌细胞A549 IGF-1R表达的抑制效应目的：构建靶向IGF-1R的siRNA表达载体，并进一步研究其对人肺癌细胞A549 IGF-1R表达的抑制效应。方法：利用pENTR/U6质粒构建IGF-1R特异性siRNA表达载体和对照组表达载体，并用PCR电泳鉴定。IGF-1R特异性siRNA表达载体以脂质体法转染人肺腺癌细胞A549 48小时，用RT-PCR、western blot法分别检测IGF-1R mRNA和蛋白的表达水平。结果：成功构建靶向IGF-1R的siRNA表达载体和对照组表达载体，分别命名为pIGF-1R-siRNA1、pIGF-1R-siRNA2和pcontrol-siRNA。pIGF-1R-siRNA1和pIGF-1R-siRNA2转染组IGF-1R mRNA表达量分别是对照组的（20.1±3.4）％和（77.8±3.9）％，蛋白表达量分别是对照组的（9.2±2.1）％和（44.9±4.1）％，组间具有显著性差异（p＜0.05）。结论：IGF-1R特异性siRNA能够有效地抑制肺癌细胞A549 IGF-1R的表达。第二部分：RNA1介导IGF-1R基因沉默对肺癌细胞A549增殖与凋亡的影响目的：研究RNAi介导IGF-1R基因沉默对肺癌细胞A549增殖、凋亡及相关信号转导通路的影响。方法：用靶向IGF-1R的siRNA质粒表达载体转染肺癌细胞A549 0h、24h、48h、72h，用MTT法检测A549细胞的增殖活性；IGF-1R特异性siRNA表达载体转染A549细胞48h，基因组DNA琼脂糖凝胶电泳（DNA ladder）检测凋亡特征性“梯状（ladder）DNA条带”的形成，并用流式细胞技术检测细胞周期的变化；用western blot法检测IGF-1R凋亡相关信号转导分子Akt和Erk1/2的变化。结果：IGF-1R特异性siRNA表达载体转染肺癌细胞A549 24h，A549细胞增殖未受显著抑制，转染48h、72h活细胞数分别为对照组的（64.1±6.7）％和（67.2±6.4）％（p＜0.05）。pIGF-1R-siRNA1转染48小时，停留在G0/G1、S及G2/M期的细胞分别占77.53％、15.7％和7.32％，而对照组G0/G1期，S期和G2/M期分别占47.23％、23.02％及29.94％；DNA ladder检测可见凋亡特征性的“梯状DNA条带”形成；活化的Erk1/2及Akt约占t-Erk1/2及t-Akt的19.52％和9.94％，有显著性差异（p＜0.05）。结论：RNAi介导IGF-1R基因沉默可有效抑制A549细胞增殖，促进其凋亡，并阻断IGF-1R抗凋亡相关信号转导通路。第三部分：RNAi介导IGF-1R基因沉默对肺癌细胞A549侵袭性及转移的影响目的：研究RNAi介导IGF-1R基因沉默对肺癌细胞A549侵袭性及侵袭相关基因表达和信号转导通路的影响，并进一步在裸鼠体内评价其对肺癌转移灶形成的影响。方法：用IGF-1R特异性siRNA表达载体转染肺癌A549细胞48h，分别用RT-PCR、western-blot及酶谱法检测MMP-2、MMP-9、u-PA的表达水平及活性；用细胞侵袭实验、迁徙运动实验评价A549细胞侵袭性变化；用静脉注射IGF-1R特异性siRNA表达载体处理肺转移裸鼠，20天后处死，计数肺表面和显微镜下转移瘤结节，用RT-PCR检测荷瘤肺组织中与鼠无相关序列的人管家基因（hHPRT）表达。western blot法检测IGF-1R侵袭相关信号转导分子Akt的表达。结果：pIGF-1R-siRNA1转染组MMP-2、MM-9和u-PA mRNA水平约为对照组的4.75％、12.3％及5.04％，蛋白水平约为对照组的4.48％、17.46％、11.56％，显著低于对照组（p＜0.05）。pIGF-1R-siRNA1转染组MMP-2、MMP-9和u-PA活性约为对照组的10.38％、24.63％及36.86％，显著低于对照组（P＜0.05）。pIGF-1R-siRNA1转染组穿过含（或不含）Matrigel胶的人工膜的细胞数较对照组减少了（64.4±5.4）％或（66.1±7.6）％，组间有显著性差异（p＜0.05）。体内实验结果显示：pIGF-1R-siRNA1处理组裸鼠肺表面肿瘤转移灶（118.44±17.9）个，pcontrol-siRNA处理组（574.84±64.2）个；显微镜下pIGF-1R-siRNA1处理组肺内肿瘤转移灶（18.54±2.94）个，pcontrol-siRNA处理组（58.64±7.2）个；pIGF-1R-siRNA1转染组hHPRT mRNA表达量约为对照组的23.5％，组间具有显著性差异（p＜0.05）。pIGF-1R-siRNA1转染组p-Akt蛋白表达约为对照组的11.33％，显著低于pcontrol-siRNA转染组（p＜0.05）。结论：RNAi介导IGF-1R基因沉默可有效抑制肺癌细胞的侵袭性，抑制侵袭相关基因表达，阻断侵袭相关信号转导通路；并可明显减少裸鼠的肺转移病灶。