紫外损伤相关的线虫非编码RNA的发现与功能研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:akuma7040
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DNA损伤响应(DNADamageResponse,DDR)是一个有多个通路协同作用的复杂功能网络,它对维持基因组的稳定性和预防疾病有着重要贡献。核苷酸切除修复(NucleotideExcisionRepair,NER)主要修复紫外引起的DNA损伤,是DNA损伤响应中的重要途径。尽管还有很多参与紫外引起的DNA损伤响应(UVinducedDNAdamageresponse,UV-DDR)的基因及其编码蛋白已经被鉴定,但是人们对这一功能网络的机制的认识仍不完善。近年来,非编码转录组的研究逐渐受到重视。研究发现不同长度的非编码RNA广泛存在于各种生物中,并参与多种生命活动。然而,虽然已有若干microRNA和极个别的长ncRNA被鉴定在DNA损伤响应中发挥作用,关于中等长度的ncRNA(intermediate-sizencRNA,is-ncRNA)参与UV-DDR的研究还很有限。   我们采用高通量RNA测序的方法对秀丽隐杆线虫野生型(N2),N2经过紫外损伤处理(N2/UV100)和NER缺陷株(xpa-1)三组实验样品的70-500nt转录本进行测序,以发现中等长度的ncRNA。经过数据分析,共检测到450个新的非编码转录本。通过定制的微阵列联合芯片检测野生型和NER缺陷株中已知的is-ncRNA和测序新得到的非编码转录本的表达谱,筛选出57个UV-DDR相关的is-ncRNA候选分子,它们呈现出紫外照射前后明显的差异表达。对这些候选分子的编码潜能和保守性分析也支持了他们是具有功能意义的非编码转录本。在经过实时荧光定量PCR(QuantitativePCR,QPCR)和3RACE等方法验证的表达差异最大的is-ncRNA中,有8个是新鉴定的is-ncRNA,它们在紫外照射后表达量显著增加。我们通过RNA干扰技术对其中两个(ncRNA317和ncRNA415)在线虫体内进行knockdown,发现它们的缺陷导致了线虫机体对紫外更加敏感并且一些NER相关基因的表达下调。   我们的发现不仅为后续功能研究提供了ncRNA候选分子,也说明了这些is-ncRNA可以作为功能因子参与UV-DDR,这对我们深入了解ncRNA在UV-DDR中的作用有着重要意义。
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