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第一部分同种异体大鼠异位子宫移植动物模型的建立
目的:通过建立同种异体大鼠异位子宫移植模型,评价模型建立的手术学方法及其可行性。
方法:选用8-10周龄wistar大鼠60只,供体和受体各30只。切取供体大鼠右侧子宫角;宫颈以及3mm长的阴道组织,并连同右侧子宫血管至腹主动脉和下腔静脉。将供体大鼠的腹主动脉和下腔静脉分别与受体大鼠的腹主动脉和下腔静脉端一侧吻合,移植物包括右侧宫角和宫颈,将移植子宫宫颈在腹壁造瘘。记录每一例供体手术时间、受体手术时间、血管吻合时间和总体手术时间。手术后7天处死受体大鼠,评价移植子宫情况,同时切取移植子宫和自体子宫,行H.E染色。
结果:子宫移植供体手术时间为66±7min;血管吻合时间37±6min;受体手术时间103±16min;总体手术时间167±21min。血管吻合后开放血管10096通畅,有7例因漏血补针发生静脉吻合口局部狭窄。存活的18只受体大鼠中,有15只在手术后一周见移植子宫血流及组织形态与自体子宫相似,移植子宫成功率为83.3%,另3只大鼠的移植子宫均表现为坏死。光镜下15例大鼠移植子宫的组织学形态正常,而另3例移植子宫组织均坏死,并有大量炎性细胞浸润。
结论:建立wistar大鼠异体异位子宫移植模型是可行的,可用于子宫移植的研究。
第二部分同种异基因大鼠子宫移植急性排异反应机制
目的:观察同种异基因大鼠子宫移植急性排异反应及排斥反应期间移植子宫组织中IFNγ,TGFB一1,ILl0mRNA表达的变化情况,探讨这些变化与组织病理学诊断的相关性。
方法:选用wistar大鼠进行单角子宫异位移植,术后2—6天内每天取动物移植子宫标本进行病理学检查及实时荧光定量PCR检测IFNY,TGFβ一1,ILl0的mRNA的表达量。实验分3组,第1组:正常子宫对照组(n=6);第2组:同系异体移植子宫组(wistar—wistar)(n=30);第3组:异系异体移植子宫组(SD—Wistar)(n=30)。
结果:(1)病理学检查发现第3组移植子宫5d起逐步出现水肿,淤黑,僵硬,毛细血管血栓形成,直至手术后第6d移植物坏死。手术后2d,移植子宫间质内见少量嗜酸性粒细胞及淋巴细胞浸润;3d间质内见局灶性淋巴细胞浸润,细小血管内皮细胞肿胀;4d间质内见大片淋巴细胞浸润,腺体内颗粒细胞浸润;5d移植子宫间质内见弥漫性淋巴细胞浸润,细小血管内血栓形成,部分细胞坏死;6d移植子宫大部分细胞坏死,但组织轮廓欠清晰。第2组移植子宫手术后2—6d大体及组织病理学形态均正常。(2)正常子宫各检测基因呈低表达,并且ILiO和IFNY的mRNA的相对量低于TGFB—l;第1与第2组相比,IFNγ,TGFB一1,ILlO均无明显差异(P>O.05);第3组与第1,2组相比,除TGFβ-1术后第3天表达与第1,2两组的同期比较无明显差别外(P>O.05),IFNY,TGFβ一l,ILiOmRNA始终明显高于第1和2组(PO.05)。对比各亚组腺体上皮与内膜上皮表达情况,发现两者表达情况一致。
结论:治疗剂量的CsA能有效抑制子宫移植的急性排斥反应。它主要通过调节移植子宫的Thl/Th2/Th3细胞因子平衡向Th2漂移起作用的。ER作为子宫器官特异的蛋白,它的表达情况可能反映移植子宫的活性和功能状态。