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目的:检测p-ERK在卵巢癌组织和细胞系中的表达,并使用MEK1/2抑制剂AZD6244作用于卵巢癌细胞,观察其对卵巢癌细胞中p-ERK蛋白的表达,及对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,以探讨MAPK/ERK信号通路在卵巢癌发生、发展中的作用及意义。方法:(1)蛋白印迹法检测各种卵巢癌细胞中p-ERK蛋白的表达,并检测MEK抑制剂AZD6244对卵巢癌细胞p-ERK、ERK、PARP、Cyclin D1、Caspase-3、Dyrk1B蛋白表达的影响;(2)MTT比色法检测AZD6244对OVCAR5、OVCAR8、A2780S和SKOV3细胞增殖能力的影响;(3)流式细胞术检测AZD6244对OVCAR5、OVCAR8、A2780S和SKOV3细胞凋亡和周期的影响;(4)免疫组化法检测p-ERK蛋白在卵巢癌组织中的表达。结果:(1)卵巢癌细胞中p-ERK蛋白表达情况:SKOV3、OV2008、C13、A2780S、A2780CP、OVCAR4、OVCAR5、OVCAR8和CAOV3细胞普遍表达p-ERK蛋白。在OVCAR5、OVCAR8、A2780S和SKOV3四种细胞系中加入MEK抑制剂AZD6244(5、10μM)后均可抑制p-ERK蛋白的表达,且呈浓度依赖性,而ERK无明显变化;同时,在OVCAR5、OVCAR8和A2780S中又发现AZD6244可诱发Caspase-3下调,并伴随着Cyclin D1和Dyrk1B的降低,且在OVCAR5中PARP出现了明显的呈浓度依赖性裂解片段(89KD);而在SKOV3中未发现AZD6244引起上述三种蛋白PARP、Caspase-3和Cyclin D1的改变,反而出现了Dyrk1B蛋白表达的上调。(2)AZD6244作用于卵巢癌细胞后生存率的比较:MTT比色法显示,不同浓度(0、2.5、5、10、25、50、100μM)MEK抑制剂AZD6244干预OVCAR5、OVCAR8、A2780S和SKOV3细胞48h后,OVCAR5、OVCAR8、A2780S三种细胞表现出不同程度的抑制,且抑制作用具有浓度依赖性,各实验加药组生存率均低于对照组(0μM),差异有统计学意义(P<0.05);而在SKOV3细胞中,使用不同浓度的AZD6244作用48h后,细胞的增殖抑制作用不明显;OVCAR5、OVCAR8、A2780S和SKOV3四种细胞系的半数抑制浓度(IC50)分别为3.88μM、12.99μM、39.06μM和>100μM。(3)流式细胞术检测在OVCAR5、OVCAR8和A2780S三种细胞系中分别用AZD6244(5、10μM)处理48小时后细胞凋亡率明显增加,随着抑制剂浓度增加,细胞凋亡率随之升高,与空白对照组(0μM)相比P<0.05差异有统计学意义;而在SKOV3细胞系中随着抑制剂药物浓度的增加凋亡率无明显增加,P>0.05差异无统计学意义。流式细胞周期检测在OVCAR5和OVCAR8两种细胞系中实验组(AZD6244:5、10μM)G0/G1期比例较对照组(0μM)明显增多,出现了G0/G1期阻滞,S期细胞比例减少,呈浓度依赖关系,差异有统计学意义(p<0.05),虽然在A2780S细胞中仅AZD6244 10μM组与对照组(0μM)相比差异有统计学意义,各组G2/M期差异均无统计学意义;然而在SKOV3细胞中实验组与对照组相比,各期细胞周期比例变化较小,差异无统计学意义(p>0.05)。(4)免疫组化检测在104例卵巢癌临床标本中p-ERK的表达情况,包括早期(I和II期)56例,晚期(III和IV期)48例,其中8例为低级别浆液性癌(low grade serous carcinoma,LGSC)、55例高级别浆液性癌(high grade serous carcinoma,HGSC)、10例透明细胞癌、15例卵巢子宫内膜样癌、16例粘液性癌;结果发现p-ERK1/2在LGSC的表达显著高于HGSC(p<0.05);与LGSC相比,透明细胞癌组织中的p-ERK1/2表达与LGSC的表达相仿,呈高水平表达(p>0.05),而粘液性癌和子宫内膜样癌组织中的p-ERK1/2表达均较低(p<0.05);同时发现p-ERK阳性率的表达与患者的年龄、临床期别、术前CA125值等均无相关性,P>0.05。结论:本文研究结果发现,p-ERK1/2在上皮性卵巢癌组织和细胞中均有不同程度的表达;MEK抑制剂AZD6244在下调卵巢癌细胞p-ERK表达的同时,可不同程度的抑制各细胞系的细胞增殖,诱发细胞凋亡和G0/G1期周期阻滞,伴随着细胞凋亡蛋白PARP和Caspase-3以及周期调节蛋白Cyclin D1的改变。综上提示,MAPK/ERK通路可能在卵巢癌发生、发展中起关键作用,抑制该通路有望成为临床治疗卵巢癌的新靶点。