高原条件下缺血再灌注对心肌FAS蛋白表达及血浆IL-8和TNF-α影响的实验研究

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目的:大量研究表明,心肌缺血再灌注损伤与细胞因子密切相关;心肌细胞凋亡可能在心肌缺血再灌注损伤中发挥重要作用。本实验通过研究高原条件下缺血再灌注对心肌FAS蛋白表达及血浆IL-8和TNF-α变化的影响,为了解高原条件下缺血再灌注心肌损伤的特点做初步探索。方法: 实验将40只实验兔随机分为4组: (1)平原假手术组(Ⅰ组,n=10):开胸后左冠状动脉穿线但不结扎; (2)平原缺血再灌注组(Ⅱ组,n=10): 开胸后结扎左冠状动脉,心肌缺血1小时,再灌注24小时;(3)高原假手术组(Ⅲ组,n=10):由重庆空运至拉萨后喂养2月。开胸后左冠状动脉穿线但不结扎;(4)高原缺血再灌注组(Ⅳ组,n=10):由重庆空运至拉萨后喂养2月。开胸后结扎左冠状动脉,心肌缺血1小时,再灌注24小时。分别于手术前(T1)、缺血前(T2)、缺血1小时(T3)、再灌注后4小时(T4)、24小时(T5)采血。用放免法测定血中IL-8、TNF-α的含量,用ELISA一步夹心法测定血中cTnT的含量,光镜和电镜了解心肌组织学改变,免疫组化检测FAS在心肌的表达。结果:1、Ⅲ、Ⅳ组血浆cTnT浓度术前分别比Ⅰ、Ⅱ组高,差异显著(P<0.05)。缺血再灌注组(Ⅱ、Ⅳ)血浆cTnT浓度在冠状动脉结扎后1小时开始均迅速升高,分别与术前相比相差显著(P<0.01),再灌注4小时均达到峰值(P<0.01),再灌注24小时后均迅速下降,但仍高于术前水平(P<0.05);不论在平原还是在高原,缺血再灌注组(Ⅱ、Ⅳ)血浆cTnT浓度在T3、T4、T5时相点都比假手术组(Ⅰ、Ⅲ)高,相差显著(P<0.01)。Ⅳ组血浆cTnT浓度在T3、T4、T5时相点比Ⅱ组高且相差显著(P<0.05)。2、Ⅲ、Ⅳ组血浆IL-8浓度于术前分别比Ⅰ、Ⅱ组高,且差异显著(P<0.05)。缺血再灌注组(Ⅱ、Ⅳ)血浆IL-8浓度在冠状动脉结扎后1小时开始均迅速升高,分别与术前相比相差显著(P<0.01),再灌注4小时均达到峰值(P<0.01),再灌注24小时后均迅速下降,但仍高于术前水平(P<0.05);不论在平原还是在高原,缺血再灌注组(Ⅱ、Ⅳ)血浆IL-8浓度在T3、T4、T5时相点都比假手术组(Ⅰ、Ⅲ)高,相差显著(P<0.01)。Ⅳ组血浆IL-8浓度在T3、T4、T5时相点比Ⅱ组高且相差显著(P<0.05)。3、Ⅲ、Ⅳ组血浆TNF-α浓度于术前分别比Ⅰ、Ⅱ组高,且差异显著(P<0.05)。缺血再灌注组(Ⅱ、Ⅳ)血浆TNF-α浓度在冠状动脉结扎后1小时开始均迅速升高,分别<WP=7>与术前相比相差显著(P<0.01),再灌注4小时均达到峰值(P<0.01),再灌注24小时后均迅速下降,但仍高于术前水平(P<0.05);不论在平原还是在高原,缺血再灌注组(Ⅱ、Ⅳ)血浆TNF-α浓度在T3、T4、T5时相点都比假手术组(Ⅰ、Ⅲ)高,相差显著(P<0.01)。Ⅳ组血浆TNF-α浓度在T3、T4、T5时相点比Ⅱ组高且相差显著(P<0.05)。4、再灌注24小时后免疫组化染色,可见FAS蛋白阳性表达主要在心肌细胞。光密度检测可以发现,不论在平原还是在高原,缺血再灌注组(Ⅱ、Ⅳ)的光密度值都比相应的假手术组(Ⅰ、Ⅲ)高,相差显著(P<0.01)。Ⅳ组光密度值比Ⅱ组稍高,但无统计学意义。结论:1.高原条件下心肌缺血再灌注损伤较平原组重,血浆cTnT升高明显,心肌病理改变更重;2.心肌缺血再灌注可引起血浆TNF-α和IL-8升高,高原组更加明显,说明心肌缺血再灌注损伤可能触发全身炎症反应。
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