鸭疫里默氏杆菌病(Riemerella anatipestifer,RA)是鸭、鹅中常见的细菌性疾病,发病率高达90%以上,死亡率为5%～80%,对水禽产业危害巨大。本试验通过对海南省文昌市某鸭场提供的疑似病鸭进行病理剖解,病原菌分离培养、形态观察、生化检测、PCR鉴定、测序和耐药性检测等试验。结果表明:病鸭剖解症状为肝脏肿大,有明显心包炎,胸膜炎等特征;细菌形态为革兰氏阴性杆菌;经生化试验初步鉴定出20株疑似鸭疫里默氏杆菌,经PCR鉴定及测序其中17株为鸭疫里默氏杆菌;分离的鸭疫里默氏杆菌株对环丙沙星、阿莫西林、氟苯尼考、利福平、庆大霉素、头孢哌酮、克林霉素、头孢唑肟敏感,对新霉素和磷霉素耐药。通过对鸭疫里默氏杆菌的外膜蛋白YaeT进行相关生物信息学的分析,包括理化性质、同源性及结构。结果显示:YaeT为跨膜蛋白,由a-螺旋、无规卷曲和β-折叠构成,形成β-桶蛋白。YaeT的氨基酸序列同源性高达97%以上。推测外膜蛋白YaeT在不同血清型的鸭疫里默氏杆菌中是保守的,具有开发RA通用型疫苗的潜力。利用鸭疫里默氏杆菌标准菌株ATCC11845的基因组为模板,通过PCR克隆出外膜蛋白YaeT基因,并构建了鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白YaeT的原核表达载体pET28a-YaeT,转化到大肠杆菌BL21感受态细胞,进行了自诱导表达、纯化。结果表明YaeT基因在大肠杆菌原核表达系统中获得高效表达及纯化。应用外膜蛋白YaeT对鸭进行免疫,通过蛋白及菌体间接ELISA试验、血清杀菌试验、调理吞噬试验和攻毒试验等方法,研究外膜蛋白YaeT对鸭疫里默氏杆菌的免疫特性。结果显示:免疫YaeT蛋白ELISA的抗体滴度为1:583200,菌体ELISA抗体滴度为1:194400,均明显高于PBS组和PBS+佐剂组的相应的抗体滴度;血清抗体在体外能促进补体杀灭病原菌;YaeT蛋白组的菌落数低于PBS组与PBS+佐剂组,差异极显著(P<0.01),说明免疫血清均可促进吞噬细胞对鸭疫里默氏杆菌的吞噬作用;在攻毒试验中,PBS组的死亡率为60%,PBS+佐剂组的死亡率为50%,YaeT+佐剂组的死亡率为10%,显示接种YaeT蛋白能够较大提高雏鸭的存活率。试验表明,外膜蛋白YaeT作为基因工程疫苗,对鸭疫里默氏杆菌的免疫原性良好,免疫保护率高,为鸭疫里默氏杆菌防治开辟了新研究途径,为鸭疫里默氏杆菌基因工程疫苗的应用与推广提供了理论基础。