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本文探讨：初步分析Pax5基因在儿童期B-ALL中mRNA水平的表达情况及临床意义；建立一种简便有效的RNAi技术阻断Pax5基因在白血病细胞中的表达方法；研究Pax5阻断表达后的血液肿瘤细胞的免疫表型、增殖及凋亡等一般生物学特性的变化。从而进一步探讨Pax5基因在血液肿瘤细胞中的作用及在B-ALL治疗中的潜在应用价值。
方法：对33例临床儿童急性白血病(其中B-ALL患儿26例)应用实时荧光定量PCR法检测Pax5及其靶基因CD19的mRNA水平表达情况。利用体外转录RNAi方法设计合成Pax5特异的shRNA。转染血液肿瘤细胞株后为了评价干扰效果，应用实时荧光定量PCR和WesternBlotting方法分别检测mRNA和蛋白质水平Pax5沉默后的表达变化，筛选出有效的特异性shRNA。利用流式细胞术、MTT增殖实验以及RealTimePCR等技术检测Pax5瞬时缺失表达后血液肿瘤细胞的免疫表型、增殖、凋亡等生物学特性的变化。