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目的:本论文旨在研究沙棘叶超声波法提取黄酮的优化参数,沙棘叶和沙棘叶黄酮对阿勒泰羊生长性能、屠宰性能、血清生化指标、血清免疫指标和脂代谢的影响,并从器官、组织、细胞、分子和代谢组水平等揭示其对脂肪代谢调控机理。方法:采取单因素试验和正交设计试验,以沙棘叶为研究对象,以乙醇体积分数、料液比、超声时间和超声功率为试验因子,以黄酮提取率为指标,确定沙棘叶提取黄酮的参数的最优条件。采用单因素随机试验设计,将105只健康、年龄和体重(28kg)相近阿勒泰羊公羔羊随机分成对照组(Con组)、3个沙棘叶试验组(SJY-1组、SJY-2组和SJY-3组)和3个沙棘叶黄酮试验组(SLF-1组、SLF-2组和SLF-3组),每组3个重复,每个重复5只。对照组饲喂基础饲粮,SJY-1组、SJY-2组和SJY-3组在基础饲粮中添加2.5%、5.0%、7.5%沙棘叶,替换等量的小麦秸;SLF-1组、SLF-2组和SLF-3组添加0.10%、0.25%和0.50%沙棘叶黄酮。试验期共63d,其中预试期7d,试验期56d。饲养标准参照中国绵羊饲养标准(NY-T 816-2004),配制成全混合饲料。试验前对羊舍进行消毒。试验羊按重复群饲,日喂2次,分别为每天8:00和19:00,每次以吃饱略剩为准,自由饮水,预试期内,试验羊注射疫苗,进行驱虫和健胃等准备工作。于正试期第56d晨饲前,每组随机选取6只试验羊,采血5ml,现场离心,制备成血清,分装成3份用液氮带回实验室,在-80℃冰箱保存。1份用于全自动生化分析仪测定血清生化指标;1份用于免疫试剂盒测定免疫细胞因子;1份用于气相色谱-质谱仪进行代谢组学测定。用NIST和KEGG等数据库进行代谢组差异代谢物的鉴定和相关代谢途径分析。在正试期第56d晨饲前,从各组随机选取6只,利用自制活体瘤胃液取样器抽取瘤胃食糜约50ml。采集的瘤胃食糜迅速测定pH值,样品经处理后用液氮带回实验室,置于-70℃冷冻保存,用来测定NH3-N和VFA。在正试期结束后第二天,每组屠宰3只羊。屠宰后,用灭菌活体取样钳迅速取尾脂、腹脂、皮下脂肪、股二头肌肌肉和肌间脂肪,每只羊每个部位取3份重复样,每个样品取约2g,装入Eppendorf管,立即投放到液氮罐中,带回实验室,-70℃冰箱保存,用于荧光定量PCR法测定脂肪代谢相关基因mRNA表达量。结果:1)沙棘叶提取黄酮的单因素结果为:乙醇体积分数75%时,提取率显著提高(P<0.05);当料液比为1︰35时,提取率达到最高(P<0.05);提取时间45 min,提取率显著增加;超声波功率90%时,提取率达到最大(P<0.05)。正交试验的结果为:4个因素的最优水平组合为A2B2C3D3,即75%乙醇体积分数、料液比1:35、超声时间48 min和超声功率95%。极差分析影响沙棘叶提取黄酮的因素为:超声时间(A)>超声功率(D)>乙醇体积分数(C)>固液比(B)。2)与Con组相比,添加沙棘叶试验组显著增加FBW、ADG(P<0.05),SLF-2组、SLF-3组显著增加ADG,SJY-2组、SJY-3组和SLF-2组的ADFI显著增加(P<0.05);试验组的饲料转化率均增加。添加中高比例的沙棘叶和沙棘叶黄酮,显著增加净肉率(P<0.05);SJY-3组合SLF-3组降低脂肪率、腹脂率(P<0.05)。3)与Con组相比,随着沙棘叶和沙棘叶黄酮的添加,试验组瘤胃食糜中乙酸、丙酸、丁酸、VFA含量显著增加(P<0.05);SJY-3组显著降低pH值(P<0.05);乙酸/丙酸和乙酸/VFA各组间差异不显著(P>0.05);中高比例的沙棘叶和沙棘叶黄酮显著降低NH3-N浓度(P<0.05)。4)与Con组相比,腹部脂肪中,SJY-1组、SJY-2组、SJY-3组FAS mRNA极显著降低(P<0.01),SLF-1组、SLF-2组、SLF-3组显著下降(P<0.05);SJY-3组HSL mRNA极显著增加(P<0.01),SJY-1组、SLF-2组、SLF-3组HSL mRNA显著增加(P<0.05);SLF-2组、SLF-3组Leptin mRNA显著降低(P<0.05)。尾部脂肪中,SJY-2组、SJY-3组FAS mRNA极显著降低(P<0.01),SJY-1组显著降低(P<0.05);SJY-2组、SJY-3组HSL mRNA极显著增加(P<0.01),SLF-2组、SLF-3组HSL mRNA、Leptin mRNA显著增加(P<0.05)。皮下脂肪中,SJY-3组、SLF-1组、SLF-2组、SLF-3组FAS mRNA显著降低(P<0.05)。肌内脂肪中,SJY-3组、SLF-3组FAS mRNA显著增加(P<0.05);SJY-3组HSL mRNA极显著降低(P<0.01),SJY-2组、SLF-2组、SLF-3组HSL mRNA显著降低(P<0.05)。肌肉中,SJY-3组FAS mRNA均极显著增加(P<0.01);SLF-2组、SLF-3组FAS mRNA显著增加(P<0.05);SLF-2组、SLF-3组HSL mRNA显著下降(P<0.05)。其它指标各组间差异不显著(P>0.05)。5)SLF-1组血清总蛋白极显著增加(P<0.01),SJY-2组、SLF-2组总蛋白显著增加(P<0.05)。SLF-1组、SLF-2组白蛋白显著增加(P<0.05)。SLF-1组球蛋白极显著增加(P<0.01),SJY-2组、SLF-2组球蛋白显著增加(P<0.05)。SJY-3组、SLF-3组血清尿素氮极显著降低(P<0.01),SJY-2组血清尿素氮显著降低(P<0.05)。SJY-2组、SLF-2组血清胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇显著增加(P<0.05)。SJY-2组、SLF-1组血清低密度脂蛋白胆固醇极显著增加(P<0.01),SJY-1组、SJY-3组、SLF-2组显著增加(P<0.05);SJY-2组与SJY-3组、SLF-3组碱性磷酸酶显著降低(P<0.05);其它指标各组间均不显著(P>0.05)。SJY-3组、SLF-3组血清CD4浓度显著增加(P<0.05)。SJY-2组、SLF-2组、SLF-3血清IL-1浓度显著增加(P<0.05);SJY-1组血清、SLF-2组γ-干扰素浓度显著增加(P<0.05)。6)沙棘叶对阿勒泰羊血清中小分子代谢产物中3种氨基酸和甘油、葡萄糖、半乳糖、延胡索酸、亚油酸、十八酸含量显著提高(P<0.05);显著降低β-羟基丁酸、棕榈酸、油酸、油酸酰胺、硬脂酰胺和胆固醇(P<0.05)。沙棘叶参与了12个代谢途径。沙棘叶黄酮使阿勒泰羊血清中小分子代谢产物中5种氨基酸、4种有机酸、3种碳水化合物显著提高(P<0.05);显著降低β-羟基丁酸、棕榈酸、油酸酰胺和胆固醇(P<0.05)。沙棘叶黄酮参与了20个代谢途径。结论:(1)建立和优化沙棘叶超声波法提取黄酮的技术,其最佳参数为:乙醇体积分数75%,料液比1︰35,超声波功率95%,提取时间48 min。(2)通过饲喂试验发现沙棘叶和沙棘叶黄酮在未改变发酵模式下,可显著提高阿勒泰羊瘤胃食糜中VFA和各组分含量,降低NH3-N浓度,促进瘤胃代谢和微生物蛋白合成,从而提高阿勒泰羊的日增重、采食量和净肉率,降低胴体脂肪率和腹脂率。(3)通过分析阿勒泰羊血清生化指标,发现沙棘叶和沙棘叶黄酮可以增加总蛋白,降低血清尿素氮,促进阿勒泰羊的生长;增加HDL-C含量,促进胆固醇的调运和代谢,降低脂肪;降低碱性磷酸酶含量,保护肝、肾正常生理功能。沙棘叶和沙棘叶黄酮提高阿勒泰羊血清单一免疫因子含量,可能调节和提高其免疫性能。(4)经代谢组学分析,沙棘叶、沙棘叶黄酮通过调控阿勒泰羊血清甘氨酸、缬氨酸、丙氨酸、棕榈酸、油酸酰胺,胆固醇等代谢;影响氨基酸和脂肪代谢相关途径;调节脂类合成和分解;并证实沙棘叶和沙棘叶黄酮可改变脂类代谢相关基因mRNA表达量。