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第一部分动物部分Nrf2在慢性阻塞性肺疾病大鼠模型中的作用及与IKKα/β的关系目的探讨核因子Nrf2在慢性阻塞性肺疾病发病中的作用及与NF-KB和IKKα/β之间的关系。方法36只Wistar大鼠随机分为A,B,C三个组,各12只,A组为对照组,B组为慢性阻塞性肺疾病模型组,C组为15d-PGJ2干预组,采用熏烟+气管内滴注脂多糖的方法建立模型;C组在建立模型的基础上第1天和第14天静脉注射15d-PGJ2(0.3 mg/kg)干预。各组分别进行一般情况的观察,30天后检测大鼠肺功能,经微机处理计算出FEV0.3/FVC、R1及Cdyn。测定肺功能后,进行肺泡灌洗左肺,取其上清液,检测总抗氧化能力和SOD的检测。取左肺组织固定、病理切片,部分HE染色光镜观察病理改变结果,部分切片免疫组化和右肺抽提mRNA,RT-PCR法检测Nrf2,NF-KB p65和IKKα/β的表达。所有结果应用SPSS12.0软件系统进行统计分析。结果(1)慢性阻塞性肺疾病的大鼠模型成功,模型组大鼠FEV0.3/FVC(%)和Cdyn(动态肺顺应性)明显低于正常对照组,差异有显著性(均P＜0.05),R1(气道阻力)明显高于正常对照组,差异有显著性(均P＜0.05),干预组介于了两组之间,气流受限和肺通气功能较模型组有明显改善,差异有统计学意义(P＜0.05)。(2)大鼠肺组织肺泡灌洗液氧化能力的检测示:模型组的SOD和T-AOC的水平均明显低于对照组,干预组介入两者之间,差异均有统计学意义。(3)大鼠肺及支气管组织的病理学观察模型组病理切片示模型组的肺组织破坏、增殖及炎症程度明显大于对照组,干预组介于两者之间。(4)免疫组化测得模型组中Nrf2、NF-KBp65和IKKα/β的阳性表达明显高于对照组,干预组NF-KBp65和IKKα/β介于两者之间,而与Nrf2的表达明显高于模型组,差异有显著性(均P＜0.05)。(5)RT-PCR测得模型组中Nrf2、NF-KB p65和IKKβ的mRNA的表达明显高于对照组,干预组NF-KBp65和IKKβ介于两者之间,而与Nrf2的表达明显高于模型组,差异有显著性(均P＜0.05),IKKα在三组中都无显著异常。结论(1)采用被动香烟吸入以及气管内注入脂多糖,成功复制了COPD大鼠模型。(2) COPD模型组中15d-PGJ2有抗氧化应激和抗炎症的作用,这一作用可能与Nrf2的增加有关。(3) Nrf2可能通过抑制IKKβ的表达,而抑制NF-κBp65的表达水平。第二部分细胞部分Nrf2通过抑制IKKβ途径下调支气管上皮细胞NF-κBp65和IL-8的表达目的探讨香烟烟雾提取物刺激后支气管上皮细胞后Nrf2的表达,及其是否通过IKKβ途径下调气道上皮细胞NF-κBp65和IL-8的表达。方法培养支气管上皮细胞分为7组A:正常对照组;B:烟草提取物(CSE)刺激组;C:15d-PGJ2预处理后CSE刺激组;D:Nrf2siRNA后CSE刺激组;E:阴性干扰后CSE刺激组F组和G组为IKKInhibitor抑制后的C和D组。首先通过烟草提取物的刺激使细胞氧化应激的水平增加,再通过15d-PGJ2预处理和Nrf2siRNA的方法来增加或降低Nrf2的水平,并用RT-PCR法及westblot的方法观察各组细胞NF-κBp65和IL-8的表达与Nrf2的表达的关系,及抑制IKKs后NF-κBp65和IL-8的表达及与Nrf2的表达的关系。所有结果应用SPSS12.0软件系统进行统计分析。结果(1)支气管上皮细胞在CSE的刺激下,Nrf2、IKKα/β、NF-κb p65以及IL-8的表达水平均有明显升高,差异有统计学意义。(2)在支气管上皮细胞中,PGJ2可增加Nrf2的表达,而Nrf2siRNA可成功抑制了Nrf2的表达。Nrf2的表达增加,同时伴有IKKα/β、NF-κBp65和IL-8的明显降低;Nrf2的表达被抑制后,同时伴有IKKα/β、NF-κBp65和IL-8的明显增加,差异均有统计学意义。这些变化在转录水平和翻译水平是一致的。(3)用IKK inhibitor进行干预后发现,PGJ2仍然可以增加Nrf2的表达,而Nrf2siRNA也可成功抑制了Nri2的表达。在转录水平,IKK被抑制后,IKKα/β、NF-κBp65和IL-8的都有明显的降低,差异有统计学意义,但是并不随着Nrf2的增加而降低,同时也不伴随Nrf2的降低而升高。结论(1)Nrf2在支气管上皮细胞中有抗炎症作用。(2)Nrf2抑制炎症的作用点可能位于IKKs。(3)IKKβ在Nrf2抗炎作用中起关键作用。