RNA干扰抑制MACC1对大肠癌细胞增殖及其与上皮-间质转化关系的研究

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目的:探讨采用RNA干扰方法抑制MACC1基因表达对大肠癌细胞SW620增殖及上皮间质转化的影响。方法:本实验用脂质体LipofectamineTM2000介导,将设计并合成的靶向MACC1特异性的MACC1-siRNA转染入人结肠癌细胞株SW620,同时设立阴性对照和空白对照。倒置显微镜下观察各组细胞的形态学变化。MTT检测细胞增殖活性的变化情况,并绘出各组细胞的生长曲线。采用Western blot技术检测空白组(正常非转染组)、阴性对照组和MACC1siRNA组细胞E-cadherin和Vimentin的表达。细胞免疫荧光染色观察E-cadherin和Vimentin在SW620细胞中MACC1干预下的表达。激光扫描共聚焦显微镜观察鬼笔环肽染色后细胞骨架微丝的变化。结果:SW620细胞瞬时转染效率约为70-80%。倒置显微镜下观察发现,转染MACC1-siRNA后,SW620细胞增殖明显减弱,细胞数量减少。MTT结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,RNAi组细胞增殖能力明显减弱(P均<0.05)。Western Blot结果显示:与对照组相比,MACC1siRNA组Vimentin的表达显著减弱(P<0.05),E-cadherin的表达显著增强(P<0.05)。免疫细胞荧光结果显示:转染MACC1-siRNA能显著降低SW620细胞的Vimentin的表达而促进E-cadherin的表达。激光共聚焦显微镜观察发现干扰MACC1表达后SW620细胞表面微丝减少,变稀疏,细胞骨架发生重新排列。结论:以MACC1为靶点,应用RNA干扰技术能明显抑制人大肠癌细胞株SW620的增殖和上皮间质转化过程,MACC1基因可能成为大肠癌分子治疗的潜在靶标。
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